[发明专利]细胞介导的免疫应答力试验

说明书

申请数据

本申请联系并要求2011年4月29日提交的题为“细胞介导的免疫应答力试验”的美国临时专利申请61/480,913号的优先权，其全文内容通过引用纳入本文。

技术领域

本公开内容一般涉及基于免疫学的诊断试验领域，所述基于免疫学的诊断试验包括检测细胞介导的免疫应答力试验。本公开内容指导基于对象的细胞介导的免疫应答力测定病症的阶段、发展和/或严重性。本文预期的试验能够整合到标准病理学架构中以提供诊断报告系统并方便医疗点临床管理。

背景技术

关于本说明书中作者的发表物详细书目在说明书的结尾按字母顺序集中。

在该说明书中参考的任何现有技术不应认为或不应作为承认或任何形式暗示表明该现有技术在任何国家中构成一般常识的一部分。

基于免疫学的诊断试验是检测各种病症的重要手段。这些试验类型的效果部分在于免疫系统内成分的特异性。尽管有此特异性，基于免疫学的诊断并不必总是足够灵敏以检测低水平的获得性和/或先天免疫应答活性，例如响应低度感染或出现持续低水平感染或者具有活性或潜在疾病状态的对象。需要开发在细胞介导的免疫应答力方面灵敏度提高的诊断试验。

基于免疫学的一种诊断方法形式涉及在分离细胞培养或全血液培养中用抗原或有丝分裂原激活T细胞，然后检测效应分子，例如经刺激的T细胞(也称为效应T细胞)生成的细胞因子。效应分子一般用诸如酶免疫分析、多元珠分析、酶联免疫斑点法(ELISpot)和流式细胞仪等技术检测。这些试验用于检测疾病特异性T细胞应答。T细胞试验的一个示例是QuantiFERON(注册商标；Cellestis有限公司)。这在后文被称为“QFT”，并且是基于干扰素-γ(IFN-γ)释放实验(IGRA)的测试。另一种试验使用抗CD3抗体(T细胞受体激动剂)和Toll样受体(TLR)激动剂(R848)直接刺激高度纯化的人T细胞。然而，并非所有效应分子都被检测到并且该试验不适用于全血。

快速评估细胞介导免疫性的能力和具有高度的灵敏度是具有临床重要性的。临床医师需要对疾病状态的发展及其对宿主免疫系统的影响做出正确评价。

但是，需要改进对象内细胞介导的免疫应答力试验的灵敏度。

发明内容

本文提供用于检测对象内细胞介导的免疫应答的方法，所述方法包括使用以下物质孵育所述对象的淋巴细胞：

(i)抗原；和

(ii)限制量的Toll样受体(TLR)激动剂；

然后筛选由活化的淋巴细胞产生的效应分子的水平。

所述TLR激动剂的“限制量”指如下描述的一种试剂的量：

(i)当该试剂与淋巴细胞在抗原不存在下孵育时诱导最小背景应答；和/或

(ii)以试剂对抗原比例为1:50～1:1.5存在；和/或

(iii)具有低于抗原量的浓度；和/或

(iv)是次佳的试剂量，所述试剂量为其它情况下在QFT-Nil抗原管中产生应答所需。

抗原和所述限制量的TLR激动剂和淋巴细胞的共孵育导致更灵敏的试验，使对淋巴细胞刺激的检测比其它可能的检测更早。所述增加的灵敏度包括：相较于非限制量的TLR激动剂的共孵育，对效应分子的检测增加至少10%。增加细胞介导的免疫应答试验灵敏度的能力还能使检测效应分子的较低敏感方法可行。此外，在本文公开的试验中的细胞介导的免疫应答的检测的量级可能与疾病阶段、发展和/或严重性相关。因此，本公开内容指导对象内细胞介导的免疫应答力的试验。

因此，本文提供用于检测对象内细胞介导的免疫应答活性的方法，所述方法包括使所述对象的淋巴细胞接触抗原和限制量的TLR激动剂并检测免疫细胞的免疫效应分子的存在或水平升高，其中，所述免疫效应分子的存在或水平指示所述对象的细胞介导的应答力水平。

TLR激动剂包括TLR-7/8、TLR-4、TLR-3或TLR-2激动剂。示例包括咪唑喹啉，R848，脂甘露聚糖和聚(I:C)。在一个实施方式中，所述TLR激动剂是TLR7/8激动剂R848。

有用的是，所述对象是人且所述样品是未经稀释的全血。或者，所述样品是包含约10%～100%的待测样品体积，或者包含约50%～100%的待测样品体积，或者包含约80%～100%的待测样品体积的全血。所述样品体积可以为微升量或毫升量，例如0.5μL～5mL。方便而言，将所述全血收集在含有肝素的管中，且所述免疫效应分子是IFN-γ。一般而言，所述免疫效应子采用其特异性抗体例如使用ELISA或ELISpot检测。