[发明专利]包含重组人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶的组合物和制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于治疗亨特综合征(Hunter syndrome)的组合物(其包含重组人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase，下文中称为“IDS”))、包含所述组合物的制剂、以及用于制备所述组合物和制剂的方法。

更特别地，根据本发明的用于治疗亨特综合征的组合物包含具有SEOID NO：1所示氨基酸序列的IDS作为活性成分，其中位于SEO ID NO：1之IDS氨基酸序列中第59位的半胱氨酸残基以65％或更高的摩尔比、优选以75％或更高的摩尔比、更优选以80％或更高的摩尔比转化为甲酰甘氨酸(FGly：2-氨基-3-氧代丙酸)。此外，包含在用于治疗亨特综合征的组合物中的IDS含有量为2.0至4.0摩尔(优选量为2.3至3.5摩尔，更优选量为2.5至3.0摩尔)/摩尔I DS的甘露糖-6-磷酸(mannose-6-phosphate)。

用于制备根据本发明的用于治疗亨特综合征之组合物的方法包括：

(1)对用编码由SEO ID NO：1所示之IDS的基因转化的重组细胞株进行培养，并获得培养物；和

(2)通过阴离子交换色谱、疏水色谱、阳离子交换色谱和亲和色谱对该培养物进行，

其特征在于，所述重组细胞株是在水解产物存在下进行培养，并且所述阳离子交换色谱使用pH4.0至6.0的洗脱缓冲液来进行。

由于与常规产品相比在安全性和药效方面具有优势，所以包含IDS的治疗组合物以及包含所述组合物的制剂可有效地用于治疗亨特综合征。

背景技术

亨特综合征或黏多糖贮积症II型(mucosaccharidosis type II)是溶酶体贮积症(lysosomal storage disease，LSD)，其中黏多糖(也称为糖胺聚糖(glycosaminoglycan，GAG))因IDS缺乏而未正确分解并在身体内累积。随着GAG继续在身体各处细胞中累积，亨特综合征的多种征兆变得更加明显。患有亨特综合征的一些人的身体表现包括明显的面部特征和大的头部。亨特综合征中具有代表性的症状是由于肝肿大或脾肿大而增大的腹部、耳聋、瓣膜性心脏病(valvular heart disease)、阻塞性呼吸道疾病(obstructive airway disease)以及睡眠呼吸暂停。此外，亨特综合征可影响主要关节，导致关节僵硬和运动受限。在亨特综合征的一些病例中，中枢神经系统受牵连导致发育延缓和神经系统问题。已知亨特综合征的发生率为1／162,000并且是染色体X-连锁的隐性形式的遗传病，因此给患者及家人带来极大痛苦。

因此，关于亨特综合征的治疗已经进行了多种试验，包括骨髓移植、酶替代和基因治疗。虽然骨髓移植能够终止大多数症状，但是难以找到与所有患者匹配的HLA(人白细胞抗原)。此外，骨髓移植是伴随有若干副作用的外科大手术，这样的副作用包括如果HLA不是匹配的，则患者的生命将处于高风险中。用于亨特综合征的基因治疗借助于病毒载体(例如腺病毒或反转录病毒)或非病毒载体将正常的IDS基因递送到体内。然而，基因治疗仍只是实验技术，并没有在临床上应用。至于用于亨特综合征的酶替代治疗，其施用在外部产生的IDS并且优势是简单。然而，酶替代必须持续进行，这会带来高费用。使用重组DNA技术生产的(Shire Pharmaceuticals Group)被FDA批准作为用于亨特综合征的酶替代治疗剂。然而，该药物非常昂贵且存在效果和安全性差的缺点。

如上所述，尽管已经开发了多种用于亨特综合征的治疗，但是仍迫切需要表现出高疗效及高安全性的新治疗和药剂(agent)。

发明内容

技术问题

本发明的一个目的是克服现有技术中遇到的问题并提供用于治疗亨特综合征的组合物和包含该组合物的制剂，所述组合物包含作为活性成分的重组IDS，所述重组IDS保证高的疗效和安全性并通过改进的培养和纯化过程来生产。

本发明的另一个目的是提供用于制备用于治疗亨特综合征之组合物和包含所述组合物之制剂的方法。

问题的解决方案

为了实现上述目的，本发明提供用于治疗亨特综合征的组合物，其包含具有SEO ID NO：1所示氨基酸序列的重组IDS作为活性成分，其中在59位的半胱氨酸残基以65％或更高的摩尔比、优选以75％或更高的摩尔比、更优选以80％或更高的摩尔比转化为甲酰甘氨酸(FGly)。