[发明专利]酶促氨基化

权利要求书

1.一种方法，其包括步骤：

(a) 在氧和碳水化合物氧化酶辅因子存在的情况下，将含有羟基的烃与具有氧依赖及辅因子依赖的碳水化合物氧化酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂接触，和

(b) 在氨基酸脱氢酶辅因子和氨基酸脱氢酶的底物氨基酸存在的情况下，将步骤a) 中产生的烃与具有氨基转移酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂和具有辅因子依赖的氨基酸脱氢酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂接触，

其中所述含有羟基的烃包含具有至少一个选自–(CH₂)_x–OH的取代基的5或6元环，其中x是0-4，并且

其中所述具有氧依赖及辅因子依赖的碳水化合物氧化酶活性的多肽选自来自镰刀菌NRRL 2903的半乳糖氧化酶的M1变体、来自黄孢原毛平革菌的吡喃糖氧化酶、来自皱波角叉菜的己糖氧化酶及其同源物。

2.权利要求1的方法，其中所述含有羟基的烃选自式(I)或(II)所示的化合物

其中A、B、C、D、E和F中最多两个是各自且独立地选自N、S和O的原子，并且其他为C，

其中R³选自H、卤素、取代的或未取代的烷基、烯基、炔基、

其中x是0-20，优选0-4，

并且其中R⁴选自H和取代的或未取代的烷基、环烷基、芳基和杂芳基。

3.权利要求2的方法，

其中A、B、C、D、E和F中最多两个是各自且独立地选自N和O的原子，并且其他为C，

其中R³选自和

其中x是0-4，

并且其中R⁴选自H和含有1-4个碳原子的烷基。

4.权利要求3的方法，其中所述含有羟基的烃是环烷醇，优选环己醇。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述氨基酸脱氢酶是丙氨酸脱氢酶。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述氨基转移酶选自来自河流弧菌和脱氮副球菌的ω-氨基转移酶及其同源物。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中步骤b) 在具有甲酸脱氢酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂存在的情况下进行。

8.权利要求1-6中任一项的方法，其中步骤b) 在具有葡萄糖脱氢酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂存在的情况下进行。

9.权利要求1-6中任一项的方法，其中步骤b) 在具有葡萄糖脱氢酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂存在的情况下进行。

10.权利要求1-8中任一项的方法，其中由所述具有氨基酸脱氢酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂产生的氧化还原因子由所述具有甲酸脱氢酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂消耗。

11.权利要求1-8中任一项的方法，其中步骤a) 在H₂O₂-降解活性存在的情况下进行。

12.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述H₂O₂-降解活性由选自过氧化氢酶和辣根过氧化物酶/ABTS的多肽及其同源物或含有此类多肽的全细胞生物催化剂提供。

13.权利要求1-11中任一项的方法，其中步骤a) 和b) 在相同的反应混合物中同时进行。

14.权利要求12的方法，其中在加入对氧依赖及辅因子依赖的碳水化合物氧化酶活性必需的组分后，将至少一种对于氨基转移酶活性必需的组分，优选具有氨基转移酶活性的多肽或含有此类多肽的全细胞生物催化剂，加入到反应混合物中。

15.权利要求1-13中任一项的方法，其中氧压力的水平为2-7巴，优选3-5巴。

16.权利要求1-14中任一项的方法，其中选自具有氧依赖及辅因子依赖的碳水化合物氧化酶活性的多肽、具有氨基转移酶活性的多肽和具有辅因子依赖的丙氨酸脱氢酶活性的多肽的一种或多种，优选所有的多肽与活细胞相关。