[发明专利]用于抑制炎性皮肤老化的物质的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于抑制炎性皮肤老化的物质的筛选方法。

背景技术

通常，慢性皮肤炎症是皱纹产生的主要原因，因为它会降低皮肤的弹性。皮肤一旦出现炎症，炎症部位一般会因黑色素的色素沉淀的积累而呈现暗褐色。这种炎症反应会促进皮肤老化。老化的皮肤会因免疫的下降，尤其因皮肤细胞免疫的降低，而对各种皮肤感染较为脆弱，而且由于血清中自身抗体的不断增加，还会提高自身免疫性皮肤疾病的患病率。此外，内在性老化的皮肤中的郎格罕细胞（Langerhans cells）数量少于年轻人皮肤中的郎格罕细胞数量，而在光老化的皮肤中其数量会更少。因此，老化的皮肤甚至在微弱的刺激下也很容易发生炎症，而此炎症又会触发皮肤老化。由此，这种恶性循环将会延续下去。

发明内容

技术问题

本发明涉及提供一种有效的用于抑制炎性皮肤老化的物质的筛选方法。

技术方案

在总方面，本发明提供一种用于抑制炎性皮肤老化的物质的筛选方法，该筛选方法包括：用炎性刺激物处理免疫细胞；用候选物质处理皮肤细胞；用经炎性刺激物处理的免疫细胞处理以候选物质处理的皮肤细胞；以及，测定经免疫细胞处理的皮肤细胞中的基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的浓度。

有益效果

在本发明的一方面，用于抑制炎性皮肤老化的物质的筛选方法能够有效地筛选出用于抑制炎性皮肤老化的物质。由于本发明的方法可确定能否抑制基质金属蛋白酶-1（MMP-1），其中基质金属蛋白酶-1不是一般的MMP-1，而是由炎性细胞因子所引发的MMP-1，因此能够更精确地筛选出用于抑制炎性皮肤老化的物质。此外，会使用通过实际刺激免疫细胞而生成的细胞因子，而不会使用特定的细胞因子，从而可筛选出具有更高生物相关性的、用于抑制炎性皮肤老化的物质。进一步，由于一次就能确定能否抑制由多种炎性细胞因子所复合诱导的MMP-1生成，因此可更加简便且有效地筛选出用于抑制炎性皮肤老化的物质。

附图说明

图1展示了根据脂多糖（LPS）浓度和种类、以及干扰素-γ（INF-γ）浓度的THP-1细胞中TNF-α的产量。

图2展示了根据LPS浓度的THP-1细胞存活率。

图3展示了根据INF-γ浓度的THP-1细胞存活率。

图4展示了经LPS和INF-γ处理的THP-1细胞的存活率。

图5展示了经LPS和INF-γ处理的炎性细胞因子的生产水平。

图6展示了根据以LPS和INF-γ处理的THP-1细胞的NHF细胞中MMP-1的产率。

图7展示了经黄豆黄素处理的THP-1细胞的存活率。

图8展示了经黄豆黄素、LPS和INF-γ处理的THP-1细胞的存活率。

图9展示了经黄豆黄素处理的THP-1细胞中TNF-α的产量。

图10展示了用黄豆黄素以及有选择地用LPS和INF-γ处理的炎性细胞因子的产量。

图11展示了经黄豆黄素处理的NHF细胞的存活率。

图12展示了经LPS和INF-γ处理的THP-1细胞中MMP-1的产量、以及经黄豆黄素处理的NHF细胞中MMP-1的产量。

具体实施方式

在本发明中，所述术语“皮肤”使用了广义上的概念，是指覆盖动物体表的组织，其不仅包括脸、身体等的覆盖面，还包括头皮和头发。

在本发明中，所述术语“炎性皮肤老化”包括由炎症引发或伴随的皮肤老化。

下面，具体地描述本发明。

由炎症反应产生的细胞因子，如TNF-α、IL-1β等，能够通过与血管内皮上的受体结合而激活几种与炎症相关的信号转导途径。期间，细胞粘附因子的表达在增加，从而引起炎性细胞的外渗。经过所述炎性细胞的渗透，会生成例如若干种细胞因子或趋化因子等化学趋化活性，然后它们朝着炎症区域移动，从而诱导免疫反应。

由于这些炎性细胞因子会通过促进基质金属蛋白酶的表达来诱导胶原蛋白的降解，它们对皮肤老化起着关键作用，并且通过与受体的结合来引发连锁反应。因此，如有任一物质能够抑制炎性细胞因子的生成，进而能够抑制由炎性细胞因子诱导的基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的生成时，该物质就能当作用于抑制炎性皮肤老化的物质。