[发明专利]酶浓缩与分析

说明书

1相关申请

本专利申请涉及且要求2011年5月10日提交的标题为“Enzyme Concentration in New Born Screening Assays”的美国临时专利申请第61/484,827号的优先权，所述临时专利申请的整个公开内容通过引用并入本文。

2发明领域

本发明涉及浓缩酶的方法且涉及浓缩的酶在酶法测定中的应用。

3背景

滴致动器（droplet actuator）通常包括配置为形成用于进行滴操作的表面或缝隙的一个或多个基片（substrate）。一个或多个基片建立用于进行滴操作的滴操作表面或缝隙，且还可以包括电极排列，以进行滴操作。滴操作基片或在基片之间的缝隙可以被涂覆或填充有不与形成滴的液体相混溶的填充流体。

滴致动器被用于各种应用中，包括分子诊断分析，比如酶法测定和免疫分析。在一种应用中，酶法测定和免疫分析被用作常规测试程序的一部分，以测试新生儿的各种遗传性疾病。例如，酶法测定可以被用于测试各种溶酶体贮积病（LSD）。在新生儿测试程序中靶向的许多遗传性疾病与糖蛋白分子（例如溶酶体酶）的缺陷有关，所述糖蛋白分子仅可以代表复杂的生物样品比如血液中的总的大分子的一小部分。用于新生儿测试的样品通常是通过扎新生儿的脚后跟来收集的，以获得少量的血液（通常，两滴至三滴），以填充滤纸卡上的几个圈。从DBS样品中穿透（punch）样本（即，使用当前的技术，每进行一次测试就穿透一次）且根据特定的分析操作流程来操纵。由于血液样品被点样到固体介质上且干燥，它们必须在分析之前重构（reconstituted），其是需要将样品稀释到合适的液体介质中的步骤。对增加NBS分析中靶标糖蛋白分子的检测灵敏度的改进方法存在需要。

4发明简述

一种制备用于进行分析的样品的方法，所述方法包括：提供包含糖蛋白的输入样品；将糖蛋白从所述输入样品捕获到固体载体上；且洗涤所述样品载体，以除去所述输入样品的未结合部分。在某些实施方式中，方法包括从固体载体中洗脱糖蛋白，以产生输出样品。在某些实施方式中，方法步骤是在油中的一个或多个滴中进行的。在某些实施方式中，洗脱是通过固体载体与一种或多种糖模拟物（glycomimetic）接触来完成的。在某些实施方式中，洗脱是通过使固体载体和捕获的糖蛋白之间的可断裂键断裂来完成的。在某些实施方式中，输入样品包括选自由以下组成的组的样品物质：血液、血浆、血清、眼泪、唾液和尿。在某些实施方式中，输入样品包括新鲜血液。在某些实施方式中，输入样品包括重构的干血。在某些实施方式中，输入样品主要由血浆组成。在某些实施方式中，输入样品包括人的临床样品。在某些实施方式中，固体载体包括伴刀豆球蛋白A。在某些实施方式中，固体载体包括磁性响应珠子。在某些实施方式中，捕获的糖蛋白包括一种或多种酶。在某些实施方式中，捕获的糖蛋白包括一种或多种糖苷酶。

本发明还提供进行分析的方法，包括：进行酶浓缩方法，将固体载体暴露到底物且测量底物的酶改性。在某些实施方式中，在将酶底物添加到输出样品且测量底物的酶改性之前，酶被洗脱或以其它方式与固体载体分离。通常，底物的改性与可能存在于输出样品中的酶的存在和/或活性有关。在某些实施方式中，酶是溶酶体酶。在某些实施方式中，酶是糖基化的酶。在某些实施方式中，方法是在样品收集点处进行的。在某些实施方式中，底物包含糖苷底物。在某些实施方式中，底物在接触感兴趣的酶时释放可检测物（detectable）。在某些实施方式中，底物包括在接触感兴趣的酶时释放荧光团的糖苷底物。在某些实施方式中，底物包含糖苷底物。在某些实施方式中，样品收集点是在受试者在场的情况下。在某些实施方式中，输入样品是从受试者收集的且立即装载到滴致动器上并立即进行方法。

本发明还提供计算机可读的介质，所述介质被编程以使滴致动器进行方法步骤中任一个。一种系统，所述系统包括滴致动器，所述滴致动器被联接到计算机且受计算机的控制，所述计算机被编程以使滴致动器进行方法的方法步骤中任一个。

5定义

如本文所使用的，以下术语具有所说明的意义。