[发明专利]用于观察样品的方法

说明书

本发明涉及一种用于观察样品的方法，所述方法包括以下步骤：a）提供基本上透明的介质形成的物体（G，V），所述介质具有第一折射率（nint）且包括凸形、圆形或多平面的第一表面（S1）和基本上平坦的第二表面（S2），所述第一表面将所述物体与周围介质（MA）分离开，所述周围介质具有低于所述第一折射率的第二折射率（next），待观察的所述样品包括在所述物体内或沉积在所述第一表面上；b）通过所述基本上平坦的第二表面观察所述样品；以及c）通过在所述步骤b）期间检测与所述物体相对应的光环，确定所述样品中的物质或对象的存在。

技术领域

本发明涉及一种用于观察样品的方法，尤其用于生物或化学应用，例如，用于检测微生物或对微生物计数以及研究化学反应的动力学。

背景技术

根据优选实施方式的方法基于使用包含待观察样品的微滴或所述样品本身。由AB Theberge等所著的文章“Microdroplets in Microfluidics:An Evolving Platformfor Discoveries in Chemistry and Biology”（Angew Chem Int Ed2010，49，5846–5868）综述了用于化学和生物学中的各种应用中的基于使用液态微滴的微流体技术。术语“微滴”指直径（或通常为主要尺寸）的范围为1μm至100μm的液滴。

文献US2005/0221339描述了一种用于对在微流体系统中操作的微滴中的化学成分进行光学检测的方法。

由B Rotman所著的文章“Measurement of activity of single molecules ofβ-D-Galactosidase”，美国国家科学院院刊（Proceedings of the Natl Acad Sci USA），1961，47，第1981-1991页，描述了一种用于检测酶的分离的分子的方法。在该方法中，包含酶（高度稀释的）和用于该酶的荧光基质的水溶液被喷到在两个显微镜用载玻片之间限定的小体积的硅酮油中。考虑到该硅酮油密度小于水且不与水混溶，该溶液形成置于下显微镜用载玻片的上表面上的微滴。然后，借助显微镜，通过显微荧光测定对液滴进行分析。包括该酶的至少一个分子的液滴显现为发光盘，而不包含所述分子的液滴显现为发光环的形式。

这种方法的主要限制在于由荧光发出的光的强度低。当液滴中包含的微观尺寸的对象对光的散射（弹性散射或拉曼散射）被观察到时，出现类似的问题。

发明内容

本发明的目的是通过提出一种用于观察样品的配置克服这种限制，这种配置提高了由样品发出或散射的光的收集效率。然而，本发明不限于使用液滴，而包括液滴由固体介质或凝胶形成的物体代替的情况。

因此，在一方面，本发明提供了一种用于观察样品的方法，所述方法包括以下步骤：

a）提供基本上透明的介质的物体，所述基本上透明的介质具有第一折射率nint且具有凸形、圆形或多平面的第一表面和基本上平坦的第二表面，所述第一表面将所述物体与周围介质分离开，所述周围介质具有第二折射率next，待观察的所述样品由所述物体构成或位于所述物体内或沉积在所述第一表面上；以及

b）观察所述样品；

其特征在于：

-在步骤b）期间，通过所述基本上平坦的第二表面观察所述样品；以及

-所述第二折射率低于所述第一折射率。

所述方法可以包括步骤c），所述步骤c）用于根据在步骤b）期间观察所述样品的结果来确定所述样品中的物质或对象的存在。尤其是，对象可以是生物物种，如微生物，例如，细菌、酵母、真菌、病毒等。例如，待检测的物质可以溶解或分散在透明或半透明的介质中。