[发明专利]通过一步法制备类美登素抗体缀合物

说明书

相关申请的交叉引用

本专利申请要求2011年3月29日提交的美国临时专利申请号61/468,997和2011年3月29日提交的美国临时专利申请号61/468,981的权益，所述临时专利申请以引用的方式并入。

发明背景

适用于治疗癌症和其他疾病的抗体-药物缀合物（Antibody-Drug-Conjugate，ADC）通常由三种不同的要素构成：细胞结合剂；连接子；以及细胞毒性剂。使细胞结合剂（如抗体）结合于细胞毒性剂的常规方法采用两个不同的与抗体反应的步骤。在第一反应步骤（修饰步骤）中，使抗体与异双官能连接子反应，以产生经过连接子修饰的抗体。然后，任选地从过量连接子或经过水解的连接子试剂中纯化经过修饰的抗体产物。在第二反应步骤（结合步骤）中，使经过连接子修饰的抗体与含有反应性基团（如硫醇）的细胞毒性剂反应，以产生抗体-细胞毒性剂缀合物，在额外的纯化步骤中再次纯化这种缀合物。

先前已经被描述为用来制造抗体-细胞毒性剂缀合物的方法是复杂的，因为这些方法受到进行起来较繁琐或产生相比最佳期望的来说纯度较低或稳定性较差的免疫缀合物的步骤的阻碍。因此，将需要修改或除去一个或多个制造步骤，同时改善产品质量，如纯度和/或稳定性。

鉴于前述内容，本领域中需要开发制备细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物的改进方法，所述缀合物实质上具有高纯度并且可以在避免繁 琐步骤的情况下并通过降低使用者的时间和成本来制备。本发明提供了这种方法。本发明的这些和其他优势以及额外的本发明特征将从本文所提供的本发明描述中显而易见。

发明概要

本发明提供一种制备细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物的方法，其包含以下步骤：使细胞结合剂与细胞毒性剂接触以形成包含细胞结合剂和细胞毒性剂的第一混合物，然后在pH值为约4到约9的溶液中使包含细胞结合剂和细胞毒性剂的第一混合物与包含连接子的双官能交联剂接触以提供包含以下的混合物：（i）细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物，其中细胞结合剂经连接子化学偶合于细胞毒性剂，（ii）游离细胞毒性剂，以及（iii）反应副产物。所述方法可以进一步包含纯化混合物以提供经过纯化的细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物的步骤。

本发明的方法提供具有高纯度和/或高稳定性的细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物。为了实现缀合物的高纯度和/或高稳定性，必需的是首先使细胞毒性剂与细胞结合剂接触以形成包含细胞结合剂和细胞毒性剂的混合物，随后使混合物与双官能交联剂接触。

本发明还包括一种细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物，其根据本文所描述的方法来制备。

发明详述

本发明提供一种制备细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物的一步法。所述方法包括使细胞结合剂（例如，抗体）与细胞毒性剂接触以形成包含细胞结合剂和细胞毒性剂的第一混合物，然后在pH值为约4到约9的溶液中使包含细胞结合剂和细胞毒性剂的第一混合物与包含连接子的双官能交联剂接触以提供包含细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物、游离细胞毒性剂以及反应副产物的第二混合物，其中细胞结合剂 经连接子化学偶合于细胞毒性剂。然后，对第二混合物进行纯化以提供经过纯化的细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物。

在一个实施方案中，接触通过以下方式实现：提供细胞结合剂，然后使细胞结合剂与细胞毒性剂接触以形成包含细胞结合剂和细胞毒性剂的第一混合物，然后使包含细胞结合剂和细胞毒性剂的第一混合物与双官能交联剂接触。举例来说，在一个实施方案中，在反应容器中提供细胞结合剂，将细胞毒性剂加入到反应容器中（从而接触细胞结合剂），然后将双官能交联剂加入到包含细胞结合剂和细胞毒性剂的混合物中（从而接触包含细胞结合剂和细胞毒性剂的混合物）。在一个实施方案中，在反应容器中提供细胞结合剂，并且在向容器中提供细胞结合剂之后立即将细胞毒性剂加入到反应容器中。在另一个实施方案中，在反应容器中提供细胞结合剂，并且在向容器中提供细胞结合剂之后的一段时间间隔（例如，在向空容器（space）中提供细胞结合剂之后约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约1小时、约1天或更长时间）之后将细胞毒性剂加入到反应容器中。可以快速地（即，在短时间间隔内，如约5分钟、约10分钟）或缓慢地（如通过使用泵）加入细胞毒性剂。