[发明专利]具有对碳青霉烯类的抗性的细菌的检测

说明书

技术领域

本发明涉及一种适合筛选抗碳青霉烯类的细菌的检测和鉴定方法。

背景技术

对β-内酰胺抗生素如青霉素和头孢菌素抗性的增加使治疗革兰氏阴性菌菌株引起的感染变得复杂。因此这些抗生素被其他广谱抗微生物剂代替。在这些广谱抗微生物剂中，碳青霉烯类已起到重要作用，特别是对于治疗住院患者。碳青霉烯类针对大多数革兰氏阳性和革兰氏阴性需氧细菌以及某些厌氧细菌而发挥作用。

但是，越来越多抗碳青霉烯类的菌株出现在住院患者中。

相关的细菌非限制性地包括大肠杆菌(Escherichia coli)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanii)、丛毛单胞菌(Comamonas sp.)、气单胞菌(Aeromonas sp.)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、肠球菌(Enterococcus sp.)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、森夫顿堡沙门氏菌(Salmonella senftenberg)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)等。

对碳青霉烯类的敏感性的减少可以归因于：

●抗β-内酰胺基因的表达：

(i)ampCβ-内酰胺酶的高产，和/或

(ii)ESBL(超广谱β-内酰胺酶)，

联合细胞壁通透性的改变(不透性抗性)和/或抗生素的主动外排(Pages et al.,2009;PloS ONE,4(3))；和/或

●分解碳青霉烯类的称为碳青霉烯酶的酶的存在。

碳青霉烯酶基因可以存在于染色体和/或质粒中。由于这种质粒形式的存在，这类酶促抗性能够很大程度地蔓延，结果在流行病学角度上构成重大风险。

本领域技术人员难以容易地检测和/或鉴定抗碳青霉烯类的细菌菌株。

在申请WO2010/010083中提出特征在于使用包含美罗培南和/或厄他培南的显色培养基的方法，并且其在培养基KPC(Samra et al.,2008;J.Clin.Microbiol.,46(9):3110-3111;CHROMagar^TM,Paris,France)和COLOREX^TMKPC(BioMed Diagnostics Inc.)中实施。这种培养基不允许检测所有产生碳青霉烯酶的菌株，特别是最近出现的NDM-1菌株(Nordmann et al.,2011;J Clin Microbiol.,49(2):718-721)。在目前的流行病学背景下，特别是随着这些新NDM-1抗性的出现，仍需要提高筛选所有对碳青霉烯类的抗性机制的灵敏度和/或特异性。

法罗培南和多利培南是最近开发和测试的碳青霉烯类(Mushtaq et al.,2007;Journal of Antimicrobial Chemotherapy,59:1025-1030-Lee et al.,2011,Microbial Drug Resistance)。就申请人所知，它们从未用于直接在生物学样品中检测和/或鉴定抗碳青霉烯类的细菌菌株。

申请人已证实可以改进抗碳青霉烯类菌株的检测，更特别是所有产生碳青霉烯酶(包括KPC碳青霉烯酶和NDM碳青霉烯酶)的菌株。这满足与目前的流行病学背景，特别是新抗性如NDM-1的出现相关的需要，并且允许筛选由于所有已知类型碳青霉烯酶产生导致的所有抗性机制。

发明内容

在这方面，本发明涉及一种在生物学样品中检测和/或鉴定表现出对碳青霉烯类的抗性的细菌的方法，所述方法包括以下步骤：

a)使所述样品与包含至少一种显色剂以及法罗培南和/或多利培南的反应培养基接触；

b)进行整体温育以允许细菌生长；

c)检测表现出对碳青霉烯类的抗性的菌株。