[发明专利]血小板分析系统

说明书

发明领域

本发明涉及血小板分析系统，包括用于血小板相关的临床症状的诊断的特定试剂盒，和任选地包括血小板分析仪。

背景技术

在普通人群中血液凝固障碍是最常见的临床问题之一。称为“高凝固性”或“血栓形成倾向”的凝固的增加趋势是发病率和死亡率的主要原因。

在美国每年有大约500,000血栓形成事件，其中保守估计每年100,000死亡-大于AIDS、乳腺癌和交通事故合并相关的死亡发生。另外，每年一百一十万心肌梗死和多于150,000中风死亡发生。

在癌症患者中，血栓形成是在恶性肿瘤自身之后的第二致死的原因。然而，只有在血栓形成事件出现之后，才给予治疗。

在女性中，高凝固性是妊娠血管并发症的主要危险因素，妊娠血管并发症包括：血栓形成，重度先兆子痫，子宫内生长受限和胎儿死亡，和分娩后的血栓形成或激素治疗后的血栓形成。根据最近的文献，在发达国家，分娩后女性死亡的主要原因是急性肺血栓栓塞症。

另一个问题是与血小板相关的出血的增加趋势，其在一般人群中也是常见的。大约25%的具有月经过多-增加的月经出血-的女性具有这种异常。

涉及血栓形成和出血的发病机制的主要因素是循环血液的血小板。

血小板的性质可以通过流式细胞术测量。

流式细胞术(缩写为：FCM)是计数和检查微观粒子的技术，诸如细胞，通过将细胞悬浮在流体的流中和通过电子检测装置使它们通过。它允许每秒多至数千个颗粒的物理和/或化学特征的同时多参数的分析。流式细胞术在健康病症诸如血癌的诊断中常规地使用。

单波长的光束(通常为激光)对准到液体的流体聚焦的流之上。多个检测器瞄准在流通过光束的点：一个与光束一致(正向散射或FSC)和数个垂直于它(侧向散射或SSC)以及一个或多个荧光检测器。每个穿过光束的0.2-150微米的悬浮粒子散射光线，和颗粒中找到或附着于颗粒的荧光化学品可以激发成为比光源波长更长的发射光。散射和荧光的这种组合被检测器获得，和通过分析在每个检测器(一个用于每个荧光发射峰)的光强度波动，然后可能得到关于每个单独的颗粒的物理和化学结构的各种类型的信息。FSC与细胞体积相关和SSC取决于颗粒的内部复杂性(即，细胞核的形状，细胞质颗粒的量和类型或细胞膜粗糙度)。这是因为散射掉细胞的内部组分的光)。也参见：Tomer A[Tomer A2004],[Tomer A等人,1988],[Tomer A等人,1989a]对于血液的FCM的一般介绍。

现代的流式细胞仪能够分析“实时”地每秒分析数千个颗粒，和可以主动分开和分离具有特定性质的颗粒。流式细胞仪类似于显微镜，除了不产生细胞的图像之外，流式细胞术提供设定参数的“高通量”(大数量的细胞)自动定量。对于细胞分离和分析的进一步一般介绍，参见Tomer A[Tomer A,2002],.[Tomer A等人,1987]。

现代仪器常常具有多个激光和荧光检测器。增加的激光和检测器的数量允许多个抗体标记，和可以通过它们的表型标记可以更精确地识别目标群[Tomer A,2004]。

由流式细胞仪生成的数据可以一维作图产生直方图，或以二维点图作图。通过产生一系列的子集提取，它们称之为“门”，在这些图上的区域基于荧光强度顺序地分开。

以下出版物描述了在血小板上进行的试验，涉及血细胞计数。

SCRIPPS RESEARCH INST[US]的US5656442描述了表征血小板聚集缺陷的方法。在一个实施例中，格兰茨曼血小板无力症的CAM变体表征为具有配体结合缺陷。在另一个实施例中，具有骨髓纤维化的患者确定为具有激活缺陷。通过荧光激活的流式细胞术进行分析。系统包括外壳，在分开容器中：(a)与激活血小板结合的激活特异性配体(ASL)；(b)在正常血小板上形成配体诱导的结合位点(LIBS)的激活独立配体(AIL)，其中所述激活独立配体包括选自以下的多肽序列：RGD,LGGAKQAGDV(SEQ ID NO:1)，和KQAGDV(SEQ ID NO4):(c)抗LIBS抗体；和(d)血小板激动剂。

BERG DAVID和BERG LOIS HILL[US]的WO03028627描述了包括通过流式细胞术测定纤维蛋白原、凝血酶原组分1+2、凝血酶/抗凝血酶复合物、可溶纤维蛋白单体的激活水平的试验的方法。在五次分析的任何两次中偏离正常值用于诊断慢性疲劳综合征、纤维肌痛、或与凝固应答的激活相关的其它疾病。没有提供关于血小板激活的测量的细节。