[发明专利]HDL亚组分中的胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及样品中的HDL亚组分中的胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒。

背景技术

高密度脂蛋白(HDL)为脂蛋白之一，具有1.063～1.210的比重。已知HDL中的胆固醇(HDL-C)是冠状动脉疾病(CHD)的负面危险因子。近年来，对于作为HDL的亚组分的HDL2和HDL3的临床意义的关注提高。HDL2为比重1.063～1.125的脂蛋白，HDL3为比重1.125～1.210的脂蛋白。

从肝脏或肠道分泌出的新生HDL粘着在末梢的细胞膜上，并由此处摄取游离型胆固醇，所摄取的游离型胆固醇由于HDL表面上存在的LCAT(卵磷脂胆固醇酰基转移酶)的作用而转化成酯型胆固醇，得到以该酯型胆固醇为核心的球状的HDL3。HDL3进一步由于LCAT的作用而酯型胆固醇增加，成为HDL2。

HDL2中的胆固醇通过两个途径代谢。一个是连同HDL2一起直接被摄入肝脏并以胆汁酸的形式排出的途径，另一个是HDL2中的酯型胆固醇由于CETP(胆固醇酯转移蛋白)的作用与极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)等中性脂肪丰富的脂蛋白内的中性脂肪交换而转运至该中性脂肪丰富的脂蛋白中的途径(胆固醇逆向转运)。

关于HDL亚组分中的胆固醇的测定方法，至今，已知有伴有HDL3与HDL2的分离步骤的沉淀法、没有伴有HDL3与HDL2的分离步骤的匀相法。

作为沉淀法，已知：使用肝素、2价金属离子以及硫酸葡聚糖的、利用一个阶段的分离操作的、样品中的HDL3中的胆固醇的测定方法(例如，专利文献1、非专利文献1)；利用两个阶段的分离操作的、样品中的HDL3中的胆固醇的测定方法(例如，非专利文献2～4)等。利用一个阶段的分离操作的、样品中的HDL3中的胆固醇的测定方法是使样品中的HDL3以外的脂蛋白凝聚并分离除去而测定所得到的HDL3中的胆固醇的方法。利用两个阶段的分离操作的、样品中的HDL3中的胆固醇的测定方法为如下方法：首先，使样品中的HDL以外的脂蛋白凝聚，通过离心分离除去HDL以外的脂蛋白，接着，使所得到的含有HDL的上清液中的HDL2凝聚，通过离心分离除去HDL2，回收上清液中包含的HDL3，测定所得到的HDL3中的胆固醇。

作为匀相法，已知使用对HDL显示出高特异性的酶以及HLB值为17以上的非离子性表面活性剂的方法(例如，专利文献2)。

正在寻求没有伴有离心分离等烦杂的操作的、简便并且准确的样品中的HDL亚组分中的胆固醇的测定方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2009-207463号公报

专利文献2：日本特开2001-346598号公报

非专利文献

非专利文献1：ジャーナルオブリピッドリサーチ(Journal of Lipid Research)、49卷、5号、1130-1136页(2008年)

非专利文献2：クリニカルケミストリ(Clinical Chemistry)、34卷、11号、2322-2327页(1998年)

非专利文献3：クリニカルケミストリ(Clinical Chemistry)、36卷、2号、265-270页(1999年)

非专利文献4：ジャーナルオブリピッドリサーチ(Journal of Lipid Research)、23卷、8号、1206-1223页(1982年)

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的在于提供简便并且准确地测定样品中的HDL亚组分中的胆固醇的方法、试剂以及试剂盒。

用于解决问题的方法

本发明人为了解决上述问题，反复进行了深入的研究，结果发现如下见解：通过使用胆固醇测定用酶、2价金属盐、特定的碱金属盐以及硫酸葡聚糖或其盐，能够在没有分离除去HDL3以外的脂蛋白的情况下测定HDL3中的胆固醇，从而完成了本发明。即，本发明涉及以下的[1]～[19]。

[1]一种样品中的HDL3中的胆固醇的测定方法，其特征在于，使样品与(1)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的组合或(2)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶和胆固醇脱氢酶的组合在水性介质中反应，在没有分离除去HDL3以外的脂蛋白的情况下测定生成的物质或消耗的物质，上述水性介质含有(a)2价金属盐、(b)选自由硫酸盐、硝酸盐、碳酸盐、乙酸盐和卤化物组成的组中的碱金属盐以及(c)硫酸葡聚糖或其盐。