[发明专利]糖链荧光标记方法

说明书

技术领域

本发明是对糖链分子进行回收、分离、精制，并为了测定而进行荧光标记的糖链荧光标记方法，涉及捕捉糖链分子的糖链捕捉载体和上述糖链的标记方法。

本申请基于2011年3月11日在日本申请的特愿2011-053897号主张优先权，在此援用其内容。

背景技术

在生物化学领域，近年来，作为继核酸、蛋白质之后的第三链，糖链分子受到关注。特别是进行了细胞的分化和癌化、免疫反应和受精等的相关的研究，持续尝试创制新的医药和医疗材料。

另外，糖链是很多毒素、病毒和细菌等的受体，另外，也作为肿瘤的标记物受到关注，在这些领域中，同样也持续尝试创制新的医药和医疗材料。

但是，就糖链而言，虽然认识到了其研究的重要性，但是由于其复杂的结构和多样性，与作为第一链、第二链的核酸、蛋白质比较，研究的推进非常缓慢。

因此，近年来，要求迅速、简便并且高精度地解析糖链结构的方法，通过高效液相色谱法（HPLC）、核磁共振法、毛细管电泳法（CE法）、质谱分析法、凝集素阵列法等多种多样的方法进行糖链解析。为了使用这些各种方法对糖链进行解析，需要预先将糖链与生物体试样中包含的蛋白质、肽、脂质、核酸等分离、精制。另外，HPLC和CE从分离好、再现性好、定量性、灵敏度高等方面出发，是广泛使用的方法，但是，为了得到高的灵敏度，需要利用还原氨化法等对糖链的还原末端进行标记。但是，这些糖链的精制和标记化花费时间和工时，难以一次制备大量的试样。

对糖链进行荧光标记来进行解析的方法，已开发多种（例如专利文献1、2、3）。但是，其标记化效率不是100%，在1个样品中被标记的糖链和未被标记的糖链混合存在，该状况在使用HPLC或CE进行荧光检测时不会成为大的问题，但是在利用质谱分析法对糖链进行分析时，存在峰变得复杂的问题。另外，在标记化效率差的情况下，在利用HPLC或CE进行的分析中，也存在产生灵敏度降低的问题的可能性。现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平7-20131号公报

专利文献2：日本特开2006-098367号公报

专利文献3：日本特开2008-309501号公报

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明的目的是提供简便并且高效率地对糖链进行荧光标记的方法。

用于解决技术问题的手段

上述目的能够通过下述（1）～（7）所述的本发明来实现。

（1）一种糖链荧光标记方法，其对糖链进行荧光标记，其特征在于：使浓度为0.5mol/L以上的包含芳香胺的荧光物质与糖链反应来进行标记。

（2）如（1）所述的糖链荧光标记方法，其中，芳香胺的芳香环部分为苯环、芘环、萘环、吖啶酮环、荧光素环、丹酰环、香豆素环、吖啶环或它们中的任一个的衍生物。

（3）如（1）或（2）所述的糖链荧光标记方法，其中，包含芳香胺的荧光物质的激发波长为330～750nm。

（4）如（1）～（3）中任一项所述的糖链荧光标记方法，其中，包含芳香胺的荧光物质的发光波长为420～780nm。

（5）如（1）～（4）中任一项所述的糖链荧光标记方法，其中，上述具有芳香胺的荧光物质为选自2-氨基苯甲酰胺、2-氨基苯甲酸、8-氨基芘-1,3,6-三磺酸盐或酯、8-氨基萘-1,3,6-三磺酸盐或酯、2-氨基-9(10H）-吖啶酮、5-氨基荧光素、丹酰乙二胺、7-氨基-4-甲基香豆素、3-氨基苯甲酸、7-氨基-1-萘酚、3-（乙酰氨基）-6-氨基吖啶和上述具有芳香胺的荧光物质中的任一个的衍生物中的至少一种荧光物质。

（6）如（1）～（5）中任一项所述的糖链荧光标记方法，其中，使用糖链捕捉载体捕捉并精制糖链之后，使糖链从上述糖链捕捉载体游离，用上述包含芳香胺的荧光物质对游离的糖链进行标记。

（7）如（6）所述的糖链荧光标记方法，其中，上述糖链捕捉载体为具有由下述的（化学式1）表示的结构的聚合物颗粒：

[化学式1]

R1和R2表示可以插入有-O-、-S-、-NH-、-CO-或-CONH-的碳原子数1～20的烃链，R3、R4和R5表示H、CH₃或碳原子数2～5的烃链，m和n表示单体单元数。

（8）如（6）或（7）所述的糖链荧光标记方法，其中，上述糖链捕捉载体为具有由下述的（化学式2）表示的结构的聚合物颗粒：

[化学式2]

m和n为与上述相同的意思。