[发明专利]长效IL-1受体拮抗剂

说明书

技术领域

本发明涉及治疗肽，具体来讲是延长的IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)及其制备方法、组合物及其在医药中的用途。

背景

IL-1由机体对炎症刺激的反应产生，并介导炎症反应。已知不适当地调节通过IL-1受体的信号传导可引起严重病况，包括但不限于类风湿性关节炎和糖尿病。

阿那白滞素(商品名Kineret)是人IL-1Ra的重组非糖基化类似物，在市场出售用于治疗类风湿性关节炎。尽管阿那白滞素具有益处，其仍具有重要的局限性。首先，阿那白滞素是注射给药，患者在注射部位经历疼痛、炎症和红斑，导致一部分的新患者中断治疗。其次，阿那白滞素在血浆中具有相对短的终末半寿期(4-6小时)，因此通常需要每天注射1次(100 mg)。

已显示IL-1水平的提高损伤和破坏产生胰岛素的细胞。在2型糖尿病患者中胰岛IL-1β mRNA水平上调，提高的循环葡萄糖水平似乎促成上调。最近的研究显示用阿那白滞素拮抗IL-1在2型糖尿病的治疗中具有可能的治疗潜能；该治疗改善糖血和β细胞分泌功能和减少全身炎症标记物。脂肪细胞功能研究已支持IL-1能够削弱胰岛素信号传导。

因此，期望提供具有延长血浆半寿期的IL-1Ra。延长血浆半寿期可带来临床益处，比如更好地自始至终覆盖24小时，可允许更低频率地给药从而还减轻注射部位反应。

概述

在一些实施方案中，本发明涉及包含酰化基团的IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)化合物。

在一些实施方案中，本发明涉及包含本文限定的IL-1Ra化合物和一种或多种赋形剂的组合物。

在一些实施方案中，本发明涉及用于医药的本文限定的IL-1Ra化合物。

在一些实施方案中，本发明涉及包含选自构建体号2、构建体号3、构建体号4、构建体号5、构建体号6、构建体号7和构建体号8的序列的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明涉及包含本文限定的核苷酸序列的载体。在一些实施方案中，本发明涉及包含本文限定的核苷酸序列或本文限定的载体的宿主细胞。在一些实施方案中，本发明涉及由本文限定的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明涉及用于制备IL-1Ra化合物的方法，所述方法包括在低于25℃的温度(比如在18℃)重组表达核苷酸序列(比如本文限定的核苷酸序列)的步骤。

附图简述

图1显示核苷酸优化IL-1Ra及其变体的重组表达的SDS-PAGE分析；U：非诱导的，S：可溶性蛋白级分，P：不溶性蛋白级分。图1A显示构建体号1在37℃在三个独立克隆中的表达。图1B显示构建体号4-8在37℃的表达。图1C显示构建体号4-7在37℃与18℃的表达，其中构建体号4和5在37℃发酵3小时，而构建体号6和7在18℃发酵过夜。图1D显示构建体号2和3在800 mL振荡烧瓶培养物中的表达，培养物由0.4 mM IPTG诱导并在18℃培养过夜，I：诱导的，M：标记物(14, 20, 30, 45, 66, 97 kDa)。

详述

本发明涉及长效白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)化合物。在一些实施方案中，IL-1Ra化合物包含酰化基团。

在一些实施方案中，本发明的IL-1Ra化合物具有改善的血浆半寿期，如在i.v.给予大鼠或迷你猪后根据本文所述测定(I)或测定(II)所确定的。

令人惊奇地是，本发明人发现尽管在阿那白滞素中存在9个Lys残基，但是只有少数Lys残基，比如1或2个Lys残基，被本文所用的酰化化学靶向，见例如实施例1和2。这使得能够制备具有更少副产物的单组分Lys-酰化阿那白滞素。

在一些实施方案中，本发明的核苷酸优化构建体，比如构建体号1-8，提供更高收率的可溶性IL-1Ra化合物。

在一些实施方案中，核苷酸优化构建体(比如构建体号1-8)在低温(比如小于25℃，小于20℃或18℃)表达提供更高收率的可溶性IL-1Ra化合物。

IL-1Ra