[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒的商业化规模生产方法

说明书

发明领域

本发明涉及活的减毒猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的商业化规模生产，该病毒可用于制备基于该病毒的疫苗；涉及该病毒用于治疗猪的用途。

发明背景

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)被许多人视为目前影响全世界养猪业的最重要的疾病。1987年，该综合征首先在美国描述为“神秘猪疾病”且迅速传遍全球。其引起生殖力严重降低，致使因继发性感染引起的死亡率增加，且导致饲料转化率及平均日增重降低。不幸的是，已证明难以控制引起PRRS的病毒。

PRRS病毒(PRRSV)为一种归类于动脉炎病毒家族(family Arteriviridae)的包膜单链RNA病毒(Cavanaugh,1997)。其引起广泛的猪疾病，该猪疾病首先于1987年在美国描述为“神秘猪疾病”(Hill,1990)。该疾病在所有年龄组的猪中均表现为呼吸疾病，引起一些较年轻的猪死亡以及在繁殖适龄母猪中产生严重的生殖问题。

PRRSV可经由受感染猪与易感染猪之间的直接接触传播且常常如此。在极短距离内也可能通过空气或经由精液传播。一旦感染，病毒可在成年猪血液中保留约两周至四周，且在受感染猪中保留1至2个月或更长时间。受感染公猪可持续将病毒排在精液中长达100天以上。此长期病毒血症显著提高传播的可能性。此外，PRRS病毒可在妊娠期倒数第三期期间穿过胎盘，感染子宫内的仔猪且引起死胎或产下弱仔猪。

所有类型及规模的畜群，包括健康状态良好或一般的或者来自室内或室外单元的畜群，均可感染PRRS病毒。感染畜群可能遭遇严重的生殖力降低，以及断乳后肺炎程度提高且生长缓慢。生殖期通常持续两至三个月；然而，断乳后问题经常变成地方病。生殖疾病的特征为在妊娠后期影响种猪与小母猪的流产爆发。在妊娠约109天及112天过早产下小猪。死胎及产下弱仔猪的数目增加且引起断乳前死亡率显著增加。

传统上已在养殖场，特别是连续流动养殖场中见到呼吸期。然而，也可在肥育畜中见到作为猪呼吸疾病综合征(porcine respiratory disease complex；PRDC)的一部分的由PRRS病毒引起的呼吸问题。生长速率会降低，不能出售的猪的百分比增加，且断乳后死亡率升高。诊断结果指示存在与PRRS病毒相关联的高程度肺炎，以及一般视为继发感染原的多种其他微生物。细菌分离株可尤其包括猪链球菌(Streptococcus suis)、猪嗜血杆菌(Haemophilus suis)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、猪放线杆菌(Actinobacillus suis)、猪肺炎霉浆菌(Mycoplasma hyopneumoniae)及多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)。通常涉及的病毒剂包括猪流感病毒及猪呼吸道冠状病毒。患病猪很少对高水平的药物治疗起反应，且全进/全出(all-in/all-out)系统已无法控制该疾病。

PRRSV病毒以两种称为“美国”型与“欧洲”型的基因型存在，这种基因型共享约50%序列同源性(Dea S等人，(2000).Arch Virol145:659-88)。此两种基因型也可以其免疫性质而加以区分。有关各种分离株的大部分序列信息是基于结构蛋白，即仅占病毒基因组约4%的包膜蛋白GP5，而关于非结构蛋白(nsp)所知甚少。PRRSV的分离及疫苗的制造已在多个公开案中描述(WO92/21375、WO93/06211、WO93/03760、WO93/07898、WO96/36356、EP0676467、EP0732340、EP0835930)。

疫苗接种为减轻PRRS负担的关键方法，因为自PRRS感染恢复的猪将发展免疫反应，此免疫反应在正常情况下将保护猪免遭相同病毒株再次感染。然而，因为PRRS病毒在阳性单链RNA病毒中常发生高速率突变，故其具有变化的能力；因此，可能出现新的病毒株。在这种状况下，病毒株之间的交叉保护可能不存在，且在先前已感染的农场中可能观察到新的爆发。因此，持续需要其他疫苗。