[发明专利]胰岛素的纯化

权利要求书

1.一种分离含有蛋白溶液的蛋白组分的阴离子交换色谱方法，所述溶液包含胰岛素肽和一或多种二价或多价金属离子，所述胰岛素肽在锌离子存在下能够自缔合，所述方法包括以下步骤：

a. 将所述含有蛋白的溶液施加于固相材料的色谱柱上，其中所述胰岛素肽的装载量为至少每升柱体积6.0 g (g/L_CV)，以及其中所述溶液中所述锌离子的浓度范围为0.1-100 mM；和

b. 用pH不超过7.0的洗脱液从所述固相材料洗脱胰岛素肽；并收集相当于施加于步骤(a)中柱的至少75%重量胰岛素肽的胰岛素肽汇集液。

2.一种分离含有胰岛素溶液的蛋白组分的阴离子交换色谱方法，所述溶液包含胰岛素肽，其在锌和二价锌离子存在下能够自缔合，所述方法包含以下步骤：

a. 将所述含有胰岛素的溶液施加于阴离子交换的固相材料的色谱柱上，其中所关注的胰岛素肽的装载量为至少每升柱体积6.0 g (g/L_CV)，以及其中所述溶液中所述锌离子的浓度范围为0.1-100 mM；和

b. 用pH不超过6.8的洗脱液从所述固相材料洗脱所关注的胰岛素肽；并收集相当于施加于步骤(a)中柱的至少90%重量所关注胰岛素肽的所关注胰岛素肽的汇集液。

3.依据权利要求1或2的方法，其中所述溶液中所述锌离子的浓度范围为0.5-75 mM。

4.依据权利要求1或2的方法，其中所述锌离子和胰岛素肽的电荷当量之间的比例一般为0.1:1 - 50:1。

5.依据权利要求4的方法，其中所述锌离子和胰岛素肽的电荷当量之间的比例一般为0.3:1 - 20:1。

6.依据权利要求5的方法，其中所述锌离子和胰岛素肽的电荷当量之间的比例一般为0.4:1 - 15:1。

7.依据权利要求6的方法，其中所述锌离子和胰岛素肽的电荷当量之间的比例一般为0.5:1 - 10:1。

8.依据权利要求1或2的方法，其中洗脱液的pH不超过6.8。

9.依据权利要求8的方法，其中洗脱液的pH不超过6.6。

10.依据权利要求9的方法，其中洗脱液的pH不超过6.4。

11.依据权利要求10的方法，其中洗脱液的pH不超过6.2。

12.依据权利要求11的方法，其中洗脱液的pH不超过6.0。

13.依据权利要求12的方法，其中洗脱液的pH至少是4.0。

14.依据权利要求13的方法，其中洗脱液的pH至少是4.4。

15.依据权利要求14的方法，其中洗脱液的pH至少是4.8。

16.依据权利要求15的方法，其中洗脱液的pH至少是5.0。

17.依据权利要求8的方法，其中洗脱液的pH在4.0-6.8范围内。

18.依据权利要求17的方法，其中洗脱液的pH在4.4-6.8范围内。

19.依据权利要求18的方法，其中洗脱液的pH在4.8-6.8范围内。

20.依据权利要求19的方法，其中洗脱液的pH在4.0-6.6范围内。

21.依据权利要求20的方法，其中洗脱液的pH在4.0-6.4范围内。

22.依据权利要求21的方法，其中洗脱液的pH在4.0-6.2范围内。

23.依据权利要求22的方法，其中洗脱液的pH在4.0-6.0范围内。

24.依据权利要求8的方法，其中洗脱液的pH在4.4-6.6范围内。

25.依据权利要求24的方法，其中洗脱液的pH在4.4-6.4范围内。

26.依据权利要求8的方法，其中洗脱液的pH在4.8-6.6范围内。

27.依据权利要求26的方法，其中洗脱液的pH在4.8-6.2范围内。

28.依据权利要求8的方法，其中洗脱液的pH在5.0-6.8范围内。