[发明专利]提供或调节甜味的组合物和方法及其筛选方法

说明书

技术背景

各种甜味化合物包括单糖和二糖(葡萄糖、果糖、蔗糖)、糖醇、小分子无热值甜味剂(糖精、甜蜜素、三氯蔗糖)、二肽(阿斯巴甜、纽甜)、和蛋白甜味剂(莫尼林(monellin)、祝马丁(thaumatin)、甜味蛋白(brazzein))，所述化合物作为食品添加剂存在并且使从牙膏到药物制剂的产品变甜。然而，显然相比多年来开发的人工无热值甜味剂，人偏好天然产生的甜味剂。

在分子鉴定主要的甜味传感器是两个CG蛋白家族偶联受体(GPCR)的异二聚组合T1r2+T1r3(综述参见Bachmanov AA，Beauchamp，2007)之前，认为甜味可能依赖于糖转运体或糖门控阳离子通道(sugar-gated cation channels)(DeSimone JA，Heck GL，Mierson S，Desimone SK．，1984；Mierson S，DeSimone SK，Heck GL，DeSimone JA．，1988；Simon SA，Labarca P，Robb R．，1989；Simon SA，1991)。葡萄糖转运体(GLUT)、钠葡萄糖共转运体(SGLT)和K_ATP代谢传感器在全身和许多特定器官(例如肠、胰、心、骨骼肌、脑)内的葡萄糖内稳态和代谢中起到重要作用(综述参见Scheepers A，Joost HG，Schürmann A．，2004；McTaggart JS，Clark RH，Ashcroft FM．，2010；Nichols CG．，2006；Zhao和Keating，2007)。然而，味觉细胞中这些重要蛋白的存在与功能很大程度上未知。Liu等，(Acta Histochemica，2010)鉴定了大鼠真菌状味觉细胞中的SUR1(K_ATP的一种成分)，但是发现SUR1在大鼠轮廓味觉细胞(circumvallate taste cells)中不存在。Liu等没有检测味觉细胞类型特异性表达。Hevezi等，(PLoS One，2009)鉴定了GLUT8、GLUT9、GLUT10、GLUT13、SLC2A4RG(GLUT4的调节物)和胰岛素受体，其为猕猴味觉细胞／味蕾中潜在表达的基因。然而，这些作者没有证实这些基因在味觉细胞中的表达或者确定其在特定类型味觉细胞中是否表达。

发明内容

一方面，通过筛选测试分子对细胞中葡萄糖转运蛋白表达或活性的影响提供了一种鉴定在口腔内提供或增强甜味的分子的方法。在一个实施方式中，该方法涉及将测试分子与体外培养条件下表达葡萄糖转运蛋白的哺乳动物细胞或细胞系接触；并且测量接触的细胞或细胞系中葡萄糖转运蛋白的表达水平或功能活性。与阳性或阴性对照细胞或细胞系相比，接触测试分子的细胞或细胞系中葡萄糖转运蛋白的蛋白表达或功能活性增加可鉴定出一种提供或增强甜味的测试分子。

在另一个方面，通过筛选测试分子对于哺乳动物细胞或细胞系的效果提供了鉴定一种在口腔内提供或增强甜味的分子的方法，所述哺乳动物细胞或细胞系表达磺酰脲受体(SUR)亚基蛋白和通过ATP门控K⁺通道(K_ATP)的内向整流钾通道(Kir)亚基蛋白。在一个实施方式中，该方法涉及将测试分子与体外培养条件下表达磺酰脲受体(SUR)亚基蛋白和通过ATP门控K⁺通道(K_ATP)的内向整流钾通道(Kir)亚基蛋白的哺乳动物细胞或细胞系接触，以及测量接触的细胞或细胞系中K_ATP通道的电生理或功能活性。与阴性对照细胞或细胞系相比，接触测试分子的细胞或细胞系的K^ATP电生理或功能活性降低或抑制可鉴定提供或增强甜味的测试分子。

在另一方面，通过筛选测试分子对细胞中结合或核定位SUR1蛋白的效果提供了一种鉴定在口腔内提供或增强甜味的分子的方法。在一个实施方式中，该方法涉及将测试分子与体外培养条件下表达磺酰脲受体1(SUR1)蛋白的哺乳动物细胞或细胞系接触；以及检测测试分子与SUR1蛋白在培养中的结合。与阳性或阴性对照细胞或细胞系相比，测试分子与其所接触细胞或细胞系中的SUR1出现大量结合可鉴定一种提供或增强甜味的测试分子。

在另一个方面，提供了所述测试分子以及含有该分子的组合物在口腔内提供或增强甜味中的应用。

从下列发明详述很容易了解本发明的其他方面和优点。

附图简要说明