[实用新型]一种快速检测饲料中呕吐毒素的胶体金试剂板

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速检测饲料中呕吐毒素的胶体金试剂板，具体涉及一种检测呕吐毒素的免疫胶体金快速检测试剂板。 

背景技术

呕吐毒素(vomitoxin)，又叫做脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，F.镰刀菌的二级代谢产物，它是全球性的污染谷物的霉菌毒素之一，通常在大麦、小麦、燕麦和玉米等农作物中浓度较高。其对谷物的污染率和污染水平居镰刀菌毒素之首，而呕吐毒素又可与其他真菌毒素共存，被食入后可以共同作用于人体，对人类健康造成很大威胁。呕吐毒素的性质稳定，耐热、耐压、耐弱酸、耐储藏，一般的食品加工不能破坏其结构，加碱或高压处理可破坏部分毒素。人畜摄入了被呕吐毒素污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳和反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。此外，呕吐毒素还具有很强的细胞毒性和胚胎毒性，已被联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)确定为最危险的自然发生食品污染物之一。在1998年国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为三类致癌物。 

呕吐毒素的危害已受到很多国家高度关注，部分国家对谷物中呕吐毒素的制定了明确的限量标准。我国GB13078.3-2007“配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的允许量”中规定了猪配合饲料限量为1mg/kg、犊牛配合饲料限量为1mg/kg、泌乳期动物配合饲料限量为1mg/kg、牛配合饲料限量为5mg/kg、家禽配合饲料限量为5mg/kg；GB2715-2005“粮食卫生标准”中规定小麦、大麦、玉米及其成品粮中的呕吐毒素的限量为1000μg/kg；GB2761-2005“食品中真菌毒素限量”规定小麦和玉米的呕吐毒素的限量为1000μg/kg。 

目前，呕吐毒素的检测方法主要有薄层色谱法、气相色谱-质谱联用法，高效液相色谱法，高效液相色谱-质谱联用法和免疫学检测法。色谱法应用较为普遍，精确度和灵敏度高，但因其流程繁琐、设备昂贵、检测速度慢等原因，难以实现现场检测和普及推广。基于抗原抗体特异性反应建立起来的免疫学测定方法灵敏度高，特异性强，试样预处理简单，分析时间短，使用方便。因此，在现场监控和基层大规模筛选检测中，免疫学检测方法更实际。 

胶体金免疫层析法是在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，除了具备酶联免疫法的诸多优点外，还克服了酶联免疫法的一些不足。该方法将反应所需要的原料的全部或大部分均已整合到试剂中，反应通常只需数分钟至数十分钟，检测结果以肉眼可见的显色条带来判读。此法具有简便快速、操作简单、特异性强、不需要额外设备等优点，现已被广泛应用于生物技术的诸多领域。 

实用新型内容

本实用新型针对饲料中的呕吐毒素残留开展研究，提供一种用于现场快速筛选呕吐毒素 阳性样本的免疫胶体金快速检测试剂板。本实用新型具有简单、快速、灵敏度高等特点，无须仪器设备配合测定。检测过程不受地点限制，既可在实验室中进行，也可现场测定，15min即可完成对样品中呕吐毒素的定性和半定量测定。 

本试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。在样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻的地方有1～2mm的重叠，一方面是为了保证层析作用从样品垫到吸水垫部位的顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。 

胶体金结合垫上喷有抗呕吐毒素单克隆抗体与胶体金的结合物，胶体金颗粒的粒径大小约为40nm；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次喷有DON-OVA偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和质控线。 

本实用新型试剂板应用层析式抗体免疫竞争原理，通过抗原和金标抗体反应显色，特异性检测饲料中的呕吐毒素残留。如果样品溶液含有残留，呕吐毒素先和胶体金颗粒上的抗体反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测线时，胶体金颗粒上抗体的活性位点因被样品溶液中的呕吐毒素占据而无法与检测线上呕吐毒素特异性抗原结合；当样品中的呕吐毒素含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线显色较质控线浅甚至无显色，判定为阳性。相反，当样品中呕吐毒素含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色与质控线相近或偏深，判定为阴性。 

本实用新型试剂板的各部分组成成分与功能如下： 

塑料模板，起固定试纸条及标示功能区(加样孔、检测区、质控区)的作用。