[实用新型]一种核桃蛋白ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种核桃蛋白ELISA检测试剂盒，具体是一种核桃蛋白含量检测的酶联免疫试剂盒，特别是检测食品（如，核桃粉、乳）中核桃蛋白含量的酶联免疫检测(ELISA)试剂盒。

背景技术

近年来，随着人民生活水平的提高，食品安全问题日益凸显。“三聚氰胺事件”更使人们强化了非食品用添加剂的食品安全问题，但食用添加剂的不合法添加形势日趋恶劣，如各种各样蛋白饮品(粉、乳等)中鱼龙混杂的蛋白原料添加，各种各样的调制奶、酸奶、核桃乳、核桃粉、奶粉中添加大豆粉等，牛奶、黄牛奶、山羊奶、马奶等的相互掺假问题，极大的影响了食品消费市场的安全和消费者的消费信心。因此，加强其检验方法的研究迫在眉睫。

     目前蛋白质检测方法主要包括：蛋白质电泳技术、液相色谱技术、生物质谱技术、近红外光谱技术、免疫技术等。ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)是酶联免疫吸附剂测定的简称，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术，ELISA检测法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、经济等优点。国内已有利用大豆蛋白多克隆抗体ELISA方法测定火腿肠大豆蛋白含量，利用提纯牛乳酪蛋白免疫试验动物，获得针对酪蛋白的多克隆抗体，建立了牛奶中牛奶蛋白质含量的ELISA检测方法，具有良好的特异性、敏感性、重复性。但是核桃蛋白定量检测和掺假检验的试剂盒仍是空白。 

发明内容

本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的核桃蛋白ELISA检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，可进行一次连续多个样品中核桃蛋白含量的测定，减少了检测样本所需要的时间。 

   本实用新型核桃蛋白ELISA检测试剂盒，包括盒体、盒内的一块酶标板、一张盖板膜、9瓶试剂、放试剂的下凹瓶位、一份说明书、一份质检书，其中酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，9瓶试剂分别为阳性抗原溶液、抗体工作液、阴性血清、酶标二抗工作液、底物显色液、终止液、洗涤液、封闭稀释液、包被缓冲液，放试剂的下凹瓶位共9个，分别放置9瓶试剂，盖板膜放置于酶标板上，说明书和质检书用自封袋包裹放置于盒内。

    本实用新型所述盒体为硬纸盒；96孔的聚苯乙烯酶标板，放于真空铝箔袋内，盖板膜是塑料硬膜。

本实用新型所述9瓶试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶盛装，阳性抗原溶液装于绿色帽的透明PE塑料瓶，抗体工作液装于红色帽的透明PE塑料瓶内，阴性血清装于白色帽的透明PE塑料瓶内，酶标二抗工作液装于黄色帽的透明PE塑料瓶内，底物显色液用黑色帽的黑色PE塑料瓶内，终止液、洗涤液、封闭稀释液、包被缓冲液均用透明帽的白色 PE 塑料瓶内，下凹瓶位由塑料制成。

本实用新型所述酶标板为可拆或不可拆的固相载体，可拆酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条或8条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个或12个反应孔；盖板膜大小与酶标板横切面大小一致。

本实用新型所述阳性抗原溶液1瓶，10μl；酶标二抗工作液1瓶，1ml；阴性血清1瓶，50μl；抗体工作液1瓶，1ml；底物显色液1瓶，10ml；终止液1瓶，10ml；洗涤液1瓶，30ml；封闭稀释液1瓶，25ml，包被缓冲液1瓶，10ml，其中封闭稀释液作为封闭液、抗体稀释液、血清稀释液。

本实用新型将9瓶试剂固定在放试剂的下凹瓶位中与酶标板、盖板膜、说明书、质检书一同封装在硬纸盒内，以便于携带和运输。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定( 包括标准分析孔)，既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测，将剩下酶标反应微孔条的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，包被在酶标板上的标准品和样品中的核桃蛋白可与后面加入的一抗结合，再加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与样本中所含核桃蛋白的含量成正相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中核桃蛋白含量，其操作简便易行。 

    实验显示本试剂盒具有很高的灵敏度，标准曲线的检测范围在800ng/ml-25ng/ml，回收率范围均在 85％～115％之间；且特异性较好，与其他植物坚果如，花生、大豆、芝麻均无交叉反应；相对于其他新霉素检测方法，本试剂盒所需仪器较少，只需要酶标仪、离心机、振荡器和微量加样器等，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。