[实用新型]一种EV71抗原酶联反应检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种酶联诊断试剂盒及其用途，具体说，是涉及一种EV71抗原酶联反应检测试剂盒，属于医学、生物技术领域。

背景技术

肠道病毒71型（英文名为：Human enterovirus 71），简称EV71：EV71病毒属于小RNA 病毒科，病毒颗粒为典型的正二十面体结构。由于EV71引起的手足口病（hand - foot and mouth disease；HFMD）影响范围的广泛性、危害的严重性，该病在中国已纳入丙类传染病管理。鉴于此，世界各国学者、生物公司正致力于EV71病毒疫苗的研究。

EV71病毒属于小RNA 病毒科，病毒颗粒为典型的正二十面体结构。其基因组为单股正链RNA，长度约为7,408个核苷酸，编码开放读码框(open-reading frame, ORF)。EV71基因组编码的多聚蛋白(polyprotein)约含2,193个氨基酸，该多聚蛋白可进一步被水解成P1 、P2 、P3三个前体蛋白（图1）。经过进一步的剪切，P1前体蛋白可以进一步成熟为VP1、VP2、VP3和VP4四个病毒结构蛋白，负责病毒颗粒的装配和稳定；P2前体蛋白则进一步成熟为非结构蛋白（non-structural protein, nsp）2A(特异性蛋白酶)、2B和2C；P3 前体蛋白则用以形成非结构蛋白3A、3B（VPg，5’末端结合蛋白)、3C (特异性蛋白酶)和3D(RNA-dependent RNA polymerase, RdRp)。

肠病毒的流行与季节转换、环境变异有着极大的关联性，肠病毒只在夏季及初秋流行，每年六～九月为高峰期，气温过低的地区并不利于肠病毒生存。根据流行病学调查，肠病毒之传染途径主为粪--口传染（stool - oral），感染肠病毒的患者会经由粪便排出病毒，这些含有高浓度肠病毒的粪便会污染环境甚至地下水源，在公共卫生条件不佳的地区，极易经由污染的水源而散播该病毒。EV71对于中枢神经系统有极高的感染性，故临床上出现之症状包括脑炎（encephalitis）、无菌性脑膜炎（aseptic meningitis）、急性无力肢体麻痹（acute flaccid paralysis）、手足口症（hand - foot - mouth disease）、泡疹性咽峡炎（herpangina）、急性出血性结膜炎（acute hemorrhagic conjuctivitis）、肌肉僵直（myoclonic jerk）、头痛（headache）、发烧（fever）及呕吐（vomoting）等，而其中以手足口症及泡疹性咽峡炎最为常见。一般而言，感染肠病毒多为无症状（约50～80％）或出现轻微类似感冒的症状，病人会自然痊愈而产生抗体，但因感染肠病毒且转成重症之患者却有极高的机率死于心肺衰竭及广泛性的脑干伤害，实不容小觑。加强对EV71型感染病患的防控工作，已成为我国病毒性传染病管理工作的目标之一。而相关疫苗的研究开发和病毒抗原的快速检测试剂盒是预防控制此传染病的关键。

在EV71病毒所编码的四个结构蛋白中，VP1、VP2和VP3主要用来形成包装病毒颗粒的衣壳（capsid），而VP4则被包埋在病毒衣壳的内部，负责与核心（core）相互作用，用以稳定病毒的基因组，因此VP1、VP2和VP3形成了EV71病毒的主要抗原决定簇，其中又以VP1的抗原性最强，而成为目前抗体研究与设计开发的主要靶点。

同时，研究表明肠道病毒存在着众多的型内、型间的交叉反应性，并且存在着较高的重组性。其中EV71与Cox A16的相似性达到了80%，拥有很多共同表位，许多克隆抗体EV71的单抗具有了与Cox A16的交叉反应性。成为EV71抗原检测方法建立的一项制约。

常规的针对EV71病毒的诊断方法主要通过分离病毒，中和抗体检测和免疫组织化学法来进行。但这些方法费时、费力，无法满足疾病流行期间同时大量处理大量标本的需要。同时，鉴于EV71病毒的危害性，有必要开发一种简单快速易行的检测EV71病毒抗原表位含量的检测方法。该研究使用的特异性识别EV71病毒Vp1中保守区域基因的单克隆抗体具有高效的EV71病毒的中和效果，同时与Cox A16交叉反应性，有效避免了抗原检测中与EV71 80%相似性的Cox A16的假阳性干扰。因此，所述方法的成功开发对于疫苗的研发中抗原表位这一有效组分的检测有着重要的意义，同时该方法也为EV71疾病的防治、早期筛查、诊断工作提供了准确、简便、有效的监测手段，具有广泛的应用范围和社会需求。

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