[实用新型]一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器。具体是采用银杂化的多壁碳纳米管复合材料和咪唑盐类离子液体，构建一种检测大肠杆菌O157:H7的无标记型电化学免疫传感器，属于纳米功能材料、生物传感和环境监测技术领域。 

背景技术

大肠杆菌是与我们日常生活关系非常密切的一类细菌，属于肠道杆菌大类中的一种。其中，肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新出现的食物传播性疾病的病因。它除了引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。因此，建立一种灵敏、特异、快速的检测大肠杆菌O157:H7的方法意义重大。 

检测大肠杆菌O157:H7的方法有鉴别培养检测方法、分子生物学方法和免疫学检测方法。其特点如下。 

（1）鉴别培养检测方法，操作简单、成本低，但检测速度较慢，影响对该病原菌的及时防治。 

（2）分子生物学方法是一种快速的检测方法，以PCR为主的现代分子生物学方法经不断改进，其检测的准确率和速度都有所提高，但耗资较大，未得到广泛应用。 

（3）免疫学检测方法包括免疫磁珠富集法、酶联免疫吸附分析法、胶体金免疫层析法、免疫传感器、免疫卡片等，并且免疫反应具有特异性高、灵敏度高等特点。 

使用丝网印刷电极构建的免疫传感器对大肠杆菌O157:H7进行检测，与其它免疫方法相比，具有成本低、快速方便等优势。 

本实用新型设计了一种低成本、简单、快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器。 

实用新型内容

本实用新型所采用的技术方案是：一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器，包括PET基板，PET基板上设置有工作电极、辅助电极和参比电极，工作电极、辅助电极和参比电极与相应的电极触点通过银浆导线连接，PET基板上印刷有绝缘浆使工作电极区域有一圆形凹槽。 

本实用新型中，工作电极和辅助电极为碳浆制成。本实用新型中，参比电极为银浆制成。 

本实用新型与现有技术相比，丝网印刷电极具有制备简单、加工方便以及成本低等特点，用该丝网印刷电极制备的传感器检测方法简单，具有较高的灵敏度和特异性，可实现对大肠杆菌O157：H7的快速测定。 

附图说明

图1是丝网印刷电极示意图。 

标号说明：1. PET基板，2. 工作电极，3. 辅助电极，4. 参比电极，5.触点，6. 绝缘浆，7.圆形凹槽。 

具体实施方式

下面结合附图和实施例进一步说明本实用新型。 

实施例1

本实用新型所述的丝网印刷电极的制备，参见图1，包括如下步骤。

（1）清洗PET基板1，干燥后在基板上印刷碳浆，制成工作电极2及辅助电极3，常温干燥。 

（2）在基板上印刷银浆，制成参比电极4，并各电极与相应触点5用银浆连接起来，常温干燥。 

（3）在基板上印刷绝缘浆6，将导线覆盖，干燥后，再印刷一层绝缘浆有机涂层，在工作电极区域形成一个圆形凹槽7，干燥保存。 

（4）将丝网印刷电极在含有0.1 mol/L氯化钾的磷酸盐缓冲溶液中在+1.7 V下电化学处理5 min，晾干备用。 

实施例2

本实用新型制备的检测大肠杆菌的免疫传感器，用于检测大肠杆菌O157:H7，步骤如下。

（1）在上述制备的印刷电极的工作电极区域滴涂10μL 浓度为5 mg/mL银杂化的多壁碳纳米管（Ag-MCNT）的1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体混合液，保存至干燥。 

（2）在步骤（1）得到的工作电极表面滴涂6 μL浓度为10μg/mL的大肠杆菌O157:H7抗体，4 ℃冰箱中保存至干燥。 

（3）在步骤（2）得到的工作电极表面滴涂3 μL 质量分数为1% BSA，用于封闭非特异性活性位点，4 ℃冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，晾干成膜，将其保存在4 ℃的冰箱中。 

（4）在步骤（3）得到的工作电极表面滴涂6μL浓度梯度的大肠杆菌O157:H7抗原，4 ℃冰箱中保存至干燥。 

（5）在步骤（4）得到的工作电极表面滴涂200μL浓度为5 mmol/L铁氰化钾溶液，将该印刷电极与电化学工作站连接，利用循环伏安法对大肠杆菌O157:H7进行测定。