[实用新型]一种用于PMA/EMA与细菌死细胞DNA分子共价交联装置

说明书

技术领域

　　本实用新型涉及一种用于PMA/EMA与细菌死细胞DNA分子共价交联装置。

背景技术

实时PCR技术被应用多年，用于检测食品、饲料或环境中的病原微生物。然而，目前的PCR检测方法容易出现假阳性的结果，这造成了巨大的浪费和不必要的召回事件的发生。出现这种结果的原因是PCR技术跟其它的DNA法一样，均不能将活的跟死的细菌分开，导致了PCR技术提供了错误的结果。

为了克服以上PCR技术的弱点，避免假阳性结果的出现，将单叠氮溴化乙锭染料结合PCR技术对试样进行处理。单叠氮溴化乙锭进入死的细菌体内后与DNA分子进行结合，单叠氮溴化乙锭染料使得细菌在染色后不能被溶解，相反的是，染料不能穿透活细胞，这使得检测人员可以利用这种改进的PCR技术很容易的区分活的及死的细菌，从而避免假阳性结果的出现。

实用新型内容

由鉴于此，本实用新型的目的是提供一种用于PMA/EMA与细菌死细胞DNA分子共价交联装置，克服了现有技术的不足，操作方便、光照均匀并可进行紫外杀菌。

为了实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：

一种用于PMA/EMA与细菌死细胞DNA分子共价交联装置，包括箱体，其中，所述箱体上设有活动门、卤素灯开关、紫外灯管开关和总电源开关，所述箱体内顶部设有卤素灯，箱体两侧内壁上分别设置有至少一个紫外灯管。

进一步，所述的紫外灯管为两个。

进一步，所述箱体上还设有可视窗口。

进一步，所述卤素灯为500瓦。

本实用新型的有益效果为：

本实用新型可用于永久性修饰细菌死细胞的DNA分子，阻断DNA分子的聚合酶链式反应，从而有效区分样品中细菌的死活状态，降低PCR检测样品中致病菌的假阳性率。本实用新型可提供约20000lux的强光，进而使PMA与菌悬液混合均匀后在本装置内进行光照交联，PMA所带的光敏性叠氮基团转化为高活性的氮宾自由基，并与结合位点附近的任意碳氢化合物反应形成稳定的共价氮碳基，致使死细胞DNA分子的永久修饰，最后阻断死细胞DNA分子的聚合酶链式反应（PCR）扩增。

本实用新型的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本实用新型的实践中得到教导。本实用新型的目标和其他优点可以通过下面的说明书或者附图中所特别指出的结构来实现和获得。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图。

具体实施方式

如图1所示，本实用新型的箱体1上设有可视窗口3、活动门5、卤素灯开关6、紫外灯管开关7和总电源开关8，活动门5与箱体1铰接，箱体1顶部的内壁上设有500W的卤素灯4，箱体1两侧的内壁上分别安装有两个紫外灯管2，两个平行的紫外灯管2分别左右对称设置于箱体1的内侧面。卤素灯4提供强光，紫外灯管2用于杀菌，为了提高杀菌效果，在箱体1两侧的内壁上分别安装两个紫外灯管2。通过可视窗口3观察内部的光照交联效果。

本实用新型可用于永久性修饰细菌死细胞的DNA分子，阻断DNA分子的聚合酶链式反应，从而有效区分样品中细菌的死活状态，降低PCR检测样品中致病菌的假阳性率。本实用新型可提供约20000lux的强光，进而使PMA与菌悬液混合均匀后在本装置内进行光照交联，PMA所带的光敏性叠氮基团转化为高活性的氮宾自由基，并与结合位点附近的任意碳氢化合物反应形成稳定的共价氮碳基，致使死细胞DNA分子的永久修饰，最后阻断死细胞DNA分子的聚合酶链式反应（PCR）扩增。 

使用本实用新型快速检测饲料中沙门氏菌活细胞，采用如下步骤：

1）将饲料样品用BPW肉汤增菌，吸取500ul菌悬液于1.5mL离心管中，加入4ul 0.5mg/mL的叠氮溴化已啶溶液，将离心管置于冰盒上，在共价交联装置内曝光3min；

2）提取细菌DNA；

3）PCR扩增沙门氏菌invA基因：取试剂盒中预混酶及引物混合物，50ul体系吸取40ul，加入提取的细菌DNA10 ul进行PCR扩增，扩增条件为：94℃预变性5min，94℃变性30sec，56℃退火30 sec，72℃延伸45sec，33个循环，最后72℃终延伸10 min；

4）电泳分析：将PCR产物于1%琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳结束后，凝胶成像系统进行成像分析。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本实用新型的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本实用新型技术方案的精神和范围，均应涵盖在本实用新型的权利要求范围中。