[实用新型]一种检测猪尿中盐酸克伦特罗的免疫胶体金试剂板

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测盐酸克伦特罗的试剂板，具体涉及一种检测猪尿中盐酸克伦特罗残留的免疫胶体金试剂板。 

背景技术

盐酸克伦特罗(clenbuterol，CLEN)是一种β-兴奋剂类药物，在临床上通常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。当其应用剂量达到治疗量的5-10倍时，又具有能量重新分配、改变养分代谢途径的作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，明显促进动物生长，因此，常被用做饲料添加剂。由于用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在动物体内的残留量很大。人类食用了残留有盐酸克伦特罗的食品动物后，会出现不同程度的中毒现象。常见有恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别是对心脏病、高血压患者危害更大。长期食用则有可能导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤，重者甚至会导致死亡。 

为保障畜牧业的持续健康发展和人民的身体健康，我国农业部已在176号公告《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、特布他林列入了禁用清单。2002年农业部发布第193号公告，明确将克伦特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯及制剂列入食品动物禁用兽药。同年农业部又发布第235号公告，在所有食品动物的所有可食组织中不得检出克伦特罗、沙丁胺醇、西马特罗及其盐、酯。而欧盟在1988年就立法禁止使用盐酸克伦特罗。尽管我国明令禁止使用，然而，受经济利益驱动以及缺乏有效的监测手段，目前仍有不少养殖户违令使用β-兴奋剂，因此，建立科学、规范的药物残留监控方法十分必要。 

目前猪尿中有关盐酸克伦特罗的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱- 

串联质谱法(LC-MS-MS)、酶联免疫吸附法(ELISA)以及近几年发展起来的胶体金免疫层 

析法(GICA)等。 

高效液相色谱法是目前国内测定β-兴奋剂类药物使用最多、也是比较权威的方法，灵敏度高、重复性强、能同时分析多种β-兴奋剂类药物。关于β-兴奋剂类药物的液相色谱分析法已有多项国家标准及行业标准发布实施，该法检出限可达0.3～1μg/kg(ppb)。但该法的样品前处理相对繁琐，检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多、操作时需要专门的技术人员，难以满足现代检测快速、简捷、现场化的要求，不适于大规模样本筛查。 

免疫分析法是将抗原抗体反应与灵敏的检测系统结合而成的一种简便、快速、敏感的分析方法，一般不需要昂贵的仪器、前处理简化、灵敏、特异性强、快速，越来越多地被用于食品中药物等残留的检测。目前，应用广泛的免疫分析方法主要是酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法。 

酶联免疫吸附法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定β-兴奋剂类药物 含量的免疫分析方法，具有特异性强、灵敏度高、快速、简便等优点。但是ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，由此易造成测定结果重复性较差。而且需要用到昂贵的特殊仪器设备，具有一定的局限性。 

胶体金免疫层析法是在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。该方法将反应所需要原料的全部或大部分整合到试剂中，可在5-10min内完成对样品中β-兴奋剂类药物的定性和半定量测定，具有简单、快速、灵敏度高等特点，无须仪器设备配合测定，检测既可在实验室中进行，也可在养殖场等进行实地测定。 

实用新型内容

本实用新型针对检测需求，研制开发一种检测猪尿中盐酸克伦特罗残留的免疫胶体金快速检测试剂板。本实用新型试剂板操作简便快捷，灵敏度高，特异性好，实验结果肉眼可直观判断，无需配备仪器设备，5-10min即可完成对样品中盐酸克伦特罗药物残留的测定。 

本实用新型试剂板应用层析式抗体免疫竞争原理，通过抗原和金标抗体反应显色，特异性检测猪尿中的盐酸克伦特罗药物残留水平。如果样品溶液中含有盐酸克伦特罗残留，盐酸克伦特罗先和胶体金颗粒上的抗体反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测线时，胶体金颗粒上抗体的活性位点因被样品溶液中的盐酸克伦特罗药物占据而无法与检测线上盐酸克伦特罗特异性抗原结合；当样品中的盐酸克伦特罗含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线无显色，判定为阳性。反之，当样品中盐酸克伦特罗含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色，判定为阴性。 

本实用新型试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。相邻各部分间有1-2mm的重叠以保证层析作用从样品垫到吸水垫部位的顺利进行。