[实用新型]便于反转录PCR扩增的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种试剂盒，具体涉及一种便于反转录PCR扩增的试剂盒。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，目前很多的片段扩增是以mRNA序列为模板，经过反转录声称cDNA，然后进行PCR扩增，步骤较为复杂，涉及的试剂较多，目前在进行mRNA提取、反转录和PCR扩增试验时，需要进行试剂的配制和准备，对于实验人员来说配制和准备试剂增加了实验过程中的复杂性。并且因为制作实验试剂的过程中熟练程度和认知水平的不同，可能配制出的试剂也并不相同，从而不能保证实验结果的稳定性和可靠性。

实用新型内容

本实用新型为解决进行反转录PCR扩增实验时，由于实验人员的熟练程度和认知水平的不同，导致实验结果的稳定性和可靠性不能得到保证的问题，进而提供一种便于反转录PCR扩增的试剂盒。

本实用新型为解决上述技术问题采取的技术方案是：

本实用新型所述的一种便于反转录PCR扩增的试剂盒由盒体和七个试剂瓶组成，所述七个试剂瓶位于盒体内，所述七个试剂瓶分别为TRIZOL试剂瓶、氯仿试剂瓶、异丙醇试剂瓶、乙醇试剂瓶、RNase-Free水试剂瓶、反转录体系混合液试剂瓶和PCR体系混合液试剂瓶，盒体盒底的上端面上加工有七个圆形凹槽，所述TRIZOL试剂瓶、氯仿试剂瓶、异丙醇试剂瓶、乙醇试剂瓶、RNase-Free水试剂瓶、反转录体系混合液试剂瓶和PCR体系混合液试剂瓶对应安装在七个圆形凹槽上，所述七个试剂瓶均为不透光的棕色瓶。

本实用新型的有益效果是：

本实用新型的便于反转录PCR扩增的试剂盒在实验中试剂能够快捷、稳定地进行生物学实验室的mRNA提取、反转录和PCR扩增试验；本实用新型的试剂盒实验有效率高、大大提高了实验结果的稳定性和可靠性，并且操作简便，适合实验室中使用。

附图说明

图1是本实用新型的便于反转录PCR扩增的试剂的立体图，图2是具体实施方式一中盒底的俯视图。

具体实施方式

具体实施方式一：如图1所示，本实施方式的便于反转录PCR扩增的试剂盒由盒体8和七个试剂瓶组成，所述七个试剂瓶位于盒体8内，所述七个试剂瓶分别为TRIZOL试剂瓶1、氯仿试剂瓶2、异丙醇试剂瓶3、乙醇试剂瓶4、RNase-Free水试剂瓶5、反转录体系混合液试剂瓶6和PCR体系混合液试剂瓶7，盒体8盒底的上端面上加工有七个圆形凹槽8-1，所述TRIZOL试剂瓶1、氯仿试剂瓶2、异丙醇试剂瓶3、乙醇试剂瓶4、RNase-Free水试剂瓶5、反转录体系混合液试剂瓶6和PCR体系混合液试剂瓶7对应安装在七个圆形凹槽8-1上，所述七个试剂瓶均为不透光的棕色瓶。

具体实施方式二：如图2所示本实施方式盒体8的长度L为25cm，盒体8的宽度W为10cm，盒体8的高度H为15cm。其他组成及连接关系与具体实施方式一相同。

便于反转录PCR扩增的试剂盒实验的操作步骤：

步骤一、取100mg组织加入1ml TRIZOL试剂瓶1中的试剂匀浆，室温放置5分钟；

步骤二、在匀浆液中加入200μl氯仿试剂瓶2中的试剂，混匀后室温放置5分钟，保持温度为4℃，将混匀后匀浆液放置在离心机离上，离心时间15分钟，控制转速12000转/分钟；

步骤三、离心后取上清液加入新EP管中，加入500μl异丙醇试剂瓶3中的试剂，混匀后室温孵育10分钟；

步骤四、保持温度为4℃，将步骤三混匀的浆液放置在离心机离上，离心时间10分钟，控制转速12000转/分钟，倒掉上清液，加入75％乙醇试剂瓶4中的试剂清洗沉淀；

步骤五、保持温度为4℃，将步骤四混匀的浆液放置在离心机离上，离心时间10分钟，控制转速7500转/分钟，倒掉上清液，使沉淀物干燥呈现半透明状，加入50～100μlRNase-Free水试剂瓶5中的试剂溶解沉淀，所得溶液为提取到的总mRNA；

步骤六、取2.5μl总mRNA加入PCR管中，加入反转录体系混合液试剂瓶6中的溶液17.5μl，混合后在65℃保温1分钟，  在30℃保温1分钟，逐渐升温至65℃，升温时间为15～30分钟，在98℃保温5分钟，在5℃保持5分钟；

步骤七、反转录完成后，取反转录后的cDNA溶液1μl加入PCR管中，加入设计好的上下游引物各1μl，加入PCR体系混合液试剂瓶7中的试剂17μl，PCR反应条件为：94℃预变性5分钟，30个循环的94℃30秒、55℃30秒、72℃30秒，最后72℃延伸10分钟，所得PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳观察结果。