[发明专利]一种诱导烟草疫霉菌产生孢子囊并释放游动孢子的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，涉及一种诱导烟草疫霉菌产生孢子囊并释放游动孢子的方法。

背景技术

烟草疫霉（Phytophthora nicotianae Breda de Haan）是引起丝瓜疫病的病原菌，在丝瓜生产中为害严重。在气候适宜的条件下，疫病短期即可暴发流行，造成很大的经济损失。因此，常需要获得大量无污染的烟草疫霉菌的孢子囊或游动孢子，用于监测各地烟草疫霉菌的致病力、测定各种杀菌剂对其孢子囊和游动孢子的生物学活性，以及测定丝瓜品种的抗性水平等。目前，室内获得大量烟草疫霉菌孢子囊和游动孢子的方法主要有传统培养诱导法和新鲜寄主植物材料诱导法2种。

传统培养诱导法：将菌丝置于燕麦培养基或黑麦培养基或V8汁培养液，活化培养较长一段时间后，再加入土壤浸出液或者皮氏液，光照条件下诱导产生孢子囊，经低温处理后产生游动孢子。该方法诱导疫霉菌产生孢子囊需要10天以上，时间长。

新鲜寄主植物材料诱导法：将活化好的疫霉菌接种到新鲜寄主植物的子叶或果实中，培养一段时间后即可诱导产生孢子囊，经低温处理后产生游动孢子。该方法所需要的时间较短，但容易遭受细菌的污染，而且植物材料较难获得。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种简便、快速诱导烟草疫霉菌产生大量无污染的孢子囊并释放游动孢子的方法，用于烟草疫霉菌致病力测定、杀菌剂对烟草疫霉菌的生物活性测定以及丝瓜品种对疫病的抗病性鉴定等研究。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种诱导烟草疫霉菌产生孢子囊并释放游动孢子的方法，包括如下步骤：

（1）烟草疫霉菌活化：将烟草疫霉菌接种于PDA培养基上进行活化培养。

（2）制备产生孢子囊的诱导液：用水将市场上购买的贝奇（福建）食品有限公司生产的贝奇野菜复合蔬果汁饮料配制成体积浓度15%～25%的贝奇野菜复合蔬果汁液，灭菌后备用；制备质量浓度为0.05%～0.2%的复合肥溶液，灭菌后备用。

（3）诱导产生孢子囊：取步骤（1）已活化的烟草疫霉菌接种到步骤（2）制备的体积浓度15%～25%的贝奇野菜复合蔬果汁液中，25℃～30℃黑暗培养2d～4d；然后倒尽贝奇复合蔬果汁液，换上步骤（2）制备的质量浓度为0.05%～0.20%的复合肥溶液，于光照强度500Lux～700Lux的白色日光灯下25℃～30℃连续光照培养2d～4d，即可诱导产生孢子囊。

（4）诱导释放游动孢子：将步骤（3）经过诱导的烟草疫霉菌4℃～10℃放置20min～40min，然后置于25℃～30℃，30min后即可释放出大量的游动孢子。

步骤（1）中所述的活化培养为25℃～30℃黑暗培养2d～4d；更优选的所述的活化培养的温度为27℃。

步骤（2）中所述的水优选为双蒸水。

步骤（2）中所述的贝奇野菜复合蔬果汁的体积浓度优选为20%。

步骤（2）所述的复合肥优选为硫酸钾型15-15-15复合肥，所述的复合肥溶液的质量浓度优选为0.1%。

步骤（2）中所述的灭菌的条件优选为121℃湿热灭菌25min。

步骤（3）中所述的诱导产生孢子囊的方法优选为：取步骤（1）已活化的烟草疫霉菌边缘菌丝块置于无菌的培养皿上，加入步骤（2）制备的体积浓度20%的贝奇野菜复合蔬果汁液，使果汁液刚好浸过菌丝块，27℃黑暗培养2d；然后倾尽贝奇野菜复合蔬果汁液，换上步骤（2）制备的复合肥溶液，使复合肥溶液也刚好浸过菌丝块，置于光照强度600Lux的白色日光灯光照培养箱中27℃连续光照培养3d，即可诱导产生大量的孢子囊。

步骤（4）中所述的诱导释放游动孢子的方法优选为：将步骤（3）经过诱导的烟草疫霉菌4℃放置30min，然后置于27℃，30min后即可释放出大量的游动孢子。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

（1）快速：本发明的方法可以在5d内获得大量的烟草疫霉菌的孢子囊和游动孢子，较传统培养诱导方法相比，诱导周期可以缩短一半；与新鲜寄主植物材料诱导法的诱导周期相当。

（2）无污染：本发明的诱导液经过灭菌处理，在操作过程中亦无污染源的加入，诱导出的孢子囊和游动孢子均没有污染。

（3）诱导液可以长期保存备用：本发明的诱导液经过灭菌处理，可置于4℃冰箱中保存备用，如有需要即可拿出来使用。

附图说明

图1是诱导烟草疫霉菌产生孢子囊并释放游动孢子流程图。