[发明专利]细胞移植物的制备

说明书

技术领域

本发明关于一种供制备“异体细胞-制备-组织工程”移植物的方法及通过该方法所制备的产物。 

背景技术

间叶干细胞（MSCs），亦称为多能性基质细胞，此类细胞已知可自我再生并分化成各种不同的间叶及非间叶组织，并且于临床应用上已成为前景可期的工具，例如成骨不全症的细胞疗法（Horwitz et al.,Nat Med5,309-313,1999）；软骨及骨骼的组织工程（Caplan，Tissue Eng11，1198-1211，2005）；以及预防有害的心脏重塑及改善恢复率的心脏疗法（Pittenger and Martin，Circ Res95，9-20，2004）。 

使用源自单一健康的供给细胞的MSCs所制备的“现成”产品，在患有移植物对抗宿主疾病及克隆氏症的病患中，已在两个第III期研究中证实了其安全性（http://www.clinicaltrails.gov/）。再者，对于急性心肌梗塞病患施予异体MSCs也被报导可改善射出率（EFs）（Hare JM，et al.，JAm Coll Cardiol.54（24）：2277-2286，2009）。因此，在治疗患有心血管疾病的病患时，源自健康供给者的异体MSCs，可作为一“广用的供给细胞”。人类、狒狒、及鼠类的MSCs的免疫抑制特性也在活体外及活体内被报导，其中对于具免疫力的狒狒，将异体MSCs应用于延长皮肤异体移植物的存活率（Bartholomew et al.，Exp Hematol.30（1）：42-48，2002），以及对于人类应用于减缓移植物对抗宿主疾病（Le Blanc et al.，Lancet.363（9419）：1439-1441，2004）。然而，许多研究证实MSCs本质上并非免疫豁免的，且于具免疫力的MHC不匹配的接受者会对于异体MSCs产生排斥反应（Nauta et al，Blood108（6）：2114-2120，2006；Spaggiari et al.，Blood. 107(4):1484-1490，2006；Eliopoulos et al.，Blood106（13）：4057-4065，2005）。因此，使用MSCs进行异体移植仍充满争议性。 

将MSCs于低氧环境下培养，称作低氧MSCs。相较于培养于正常氧环境下（约为20-21%O₂）的MSCs（称作正常氧的MSCs），低氧MSCs会分泌更多的血管新生细胞激素及生长因子（Hung et al.，Stem Cells25（9）：2363-2370，2007），并且该源自低氧MSCs的条件培养基可被用于刺激伤口的治愈（Yew et al.，Cell Transplant.，011）及骨折的治愈（Wanget al.，J Tissue Eng Regen Med.，2011）。 

此外，Savant-Bhonsale及Smita揭露一种以低氧环境（介于约2.5%至约5%的氧气（O₂））促进神经干细胞（NSCs）生长的方法及组合物，该低氧环境较传统细胞培养技术培养环境的含氧量低（US20070264712A1）。据Hung等人报导，MSCs于含0.05%至15%O₂的低密度及低氧环境下培养（较佳介于约1%至约7%的氧气），在此被称为低氧及低密度的MSCs（10至4000MSCs/cm²）。相较于正常氧的MSCs，低氧及低密度的MSCs可降低复制性衰老、增加增生率及分化潜能（US20110129918A1）。再者，当将该低氧MSCs移植入免疫缺陷小鼠的颅盖缺陷处，该等低氧MSCs可促进缺陷的修复。经移植后，低氧及低密度MSCs也可促进细胞的迁移及移植至远程（Hung et al.，PLoS One.25）：e416，2007）。然而，对于如何解决排斥的问题仍尚未被提及。 

发明内容

本发明关于一种通过将细胞培养于低氧或缺氧环境下降低异体细胞的排斥反应的新颖方法。 

在一方面，本发明提供一种适合移植至个体的细胞移植物，其为包含具有NK配体表达量减少的非天然生成的细胞。 

另一方面，本发明提供一种制备当移植至个体时引发低排斥反应或不引发排斥反应的细胞移植物的方法，其包含将至少一种自捐赠者分离的细胞培养于介于0%至约7%氧气的低氧环境下。 

于本发明一优选具体实施例中，该低氧环境介于0%至约2.5%的氧气。在本发明的一实施例中，该低氧环境为约1%的氧气。