[发明专利]OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。

背景技术

老年人骨质疏松发病率较高，全球有2亿骨质疏松患者，并且女性多于男性。根据世界卫生组织（WHO）的标准，美国国家健康和营养调查（NHANES Ⅲ，1988~1994年）结果表明，骨质疏松严重影响老年人生活质量，50岁以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他们的一生中都会出现骨质疏松性骨折，一旦患者经历了第一次骨质疏松性骨折，继发性骨折的危险明显加大。中国老年人居于世界首位，现有骨质疏松症患者9000万，占总人口的7.1%。随着社会老龄化的进程，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050 年将增加到2.21亿，那时全世界一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，绝大部分在中国。有学者对1995~1996年美国骨质疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年发生数进行调查显示，每年发生骨质疏松性骨折150万次，其中椎体骨折70万次，腕部骨折20万次，髋部骨折30万次，其它骨折30万次。

当骨折发生时，患者最初的感受便是疼痛。在骨折早期治疗过程中，疼痛从始至终都存在着。它不仅影响患者的治疗效果，同时也直接影响肢体的功能恢复。不同类型的骨折均存在不同程度的疼痛、功能障碍、肢体肿胀，而疼痛是首先应考虑解决的问题。因为疼痛可引起交感神经兴奋，继而反射性抑制胃肠功能，引起食欲减退；疼痛还可影响睡眠质量，引起体内多种激素的释放，产生相应的病理生理改变，使机体抵抗力下降,直接影响创伤愈合及功能恢复。因此解除骨折患者的疼痛感是治疗的重要组成部分。

如果患者服用多种药物治疗骨质疏松并止痛，容易产生药物拮抗反应；若要错开服药时间一方面要靠考虑药物的半衰期，另一方面还要考虑药物有效浓度，而且给患者造成不便。

目前缺乏一种可以同时有效治疗骨质疏松和止痛的药品。

发明内容

本发明要解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和止痛药品的缺陷，而提供的一种OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌株。

OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx），大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）按以下步骤制备：

一、将含有OGP-CTx融合蛋白基因的质粒载体pUC（OGP/CTx）用BamH I和EcoRⅠ双酶切，获得OGP-CTx融合蛋白的DAN片段；

二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX-6P-1；

三、OGP-CTx融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX-6P-1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX-OGP/CTx；

四、用载体pGEX-OGP/CTx转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组子，即获得OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）。

本发明中OGP-CTx融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明中OGP-CTx融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

由于骨折患者均为突然致伤，无思想准备，再加上相关知识缺乏，治疗过程长；患者因疼痛恐惧常呈被动体位，特别是老年骨折患者，往往会引起将来功能障碍，而且恢复期较长。本发明OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）发酵产生的OGP-CTx融合蛋白可治疗骨质疏松的同时止痛，对于骨质疏松所引发骨折的患者治疗效果显著，而且由于可以明显减轻或消除患处疼痛感，患者心理负担小、康复快，愈后功能恢复期短。

本发明用于治疗骨质疏松和止痛的OGP-CTx融合蛋白微生物制剂，不产生拮抗反应，使用安全。

本发明OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）发酵产生的OGP-CTx融合蛋白共42个氨基酸。本发明采用生物基因工程手段获得大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）。采用本发明基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）可大规模发酵生产OGP-CTx融合蛋白，具有广泛应用前景。本发明为治疗骨质疏松和止痛奠定了物质基础。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式OGP-CTx融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx），大肠杆菌BL21（DE3-OGP/CTx）按以下步骤制备：