[发明专利]产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株及其构建方法

权利要求书

1.产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株，其特征在于该基因工程菌株含有融合蛋白CGRP/ AcAPc2基因。

2.根据权利要求1所述的产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株，其特征在于所述融合蛋白CGRP/ AcAPc2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求1所述的产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株的构建方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、在CGRP和AcAPc2融合基因内设计一个KpnⅠ酶切位点，合成核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的融合蛋白CGRP/AcAPc2基因，并在融合蛋白CGRP/AcAPc2基因两端分别添加BamHI和EcoRⅠ酶切位点，然后克隆在pUC57载体上，获得pUC（CGRP/AcAPc2）载体；

二、将步骤一获得的pUC（CGRP/AcAPc2）载体用BamHI和EcoRⅠ双酶切，再与同样经BamHI和EcoRⅠ双酶切的表达载体pGEX-6P-1连接，获得融合蛋白CGRP/AcAPc2基因重组表达载体pGEX-CGRP/AcAPc2；

三、然后将载体pGEX-CGRP/AcAPc2转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，随机挑取转化菌37℃过夜培养，采用质粒提取试剂盒提取质粒DNA，用KpnⅠ单酶切，并用空白质粒pGEX-6P-1作为对照，将含有KpnⅠ酶切位点的质粒进行基因测序，测序结果正确的即为阳性重组菌。

4.根据权利要求3所述的产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株的构建方法，其特征在于步骤二中pUC（CGRP/AcAPc2）载体用BamHI和EcoRⅠ双酶切的体系如下：

酶切反应条件：37℃水浴，10h。

5.根据权利要求3所述的产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株的构建方法，其特征在于步骤二中表达载体pGEX-6P-1双酶切的体系如下：

酶切反应条件：37℃水浴，10h。

6.根据权利要求3所述的产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株的构建方法，其特征在于步骤二中连接反应体系如下：

连接反应条件：16℃水浴，8～12h。