[发明专利]一株具有立体选择性脂肪酶活性的酵母菌及其生物拆分制备S-型利斯的明的方法

权利要求书

1.一株具有立体选择性脂肪酶活性的酵母菌，其特征在于，该菌株为季也蒙毕赤酵母（Pichia  guilliermondii），经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：CGMCC No.6783。

2.如权利要求1所述的酵母菌生物拆分制备S-型利斯的明的方法，其特征在于，通过如下步骤：

(1) 将季也蒙毕赤酵母（Pichia  guilliermondii）在如下条件下进行培养、发酵，获得细胞培养液或湿菌体，将其作为酶制剂；

(a) 斜面培养基为：蔗糖0~2%，蛋白胨0~1%，玉米浆0~0.5%，琼脂2%，余量为蒸馏水，各成份以重量百分比计；

(b) 种子及发酵培养基为：蔗糖0~2%，蛋白胨0~1%，玉米浆0~0.5%，余量为蒸馏水，各成份以重量百分比计，初始pH 5～10;

(c)培养条件为：温度20～50℃，时间5～48 h ，装液量系数10～60%;

(2) 将上述酶制剂接种于组成为：蔗糖0~2%，蛋白胨0~1%，玉米浆0~0.5%，余量为蒸馏水，初始pH 4～10培养基中，各成份以重量百分比计，于20℃～50℃培养12～48 h，然后加入1-[3-(乙基(甲基)氨基甲酰氧基)苯基]乙酸乙酯 0.5 ～12 g/L做为底物，于20℃～50℃转化5～50 h，生成中间转化产物S构型N-乙基-3-[(1-羟基)乙基]-N-甲基氨基甲酸苯酯，用HPLC法测定转化率和产物ee值；

（3）S构型N-乙基-3-[(1-羟基)乙基]-N-甲基氨基甲酸苯酯再经水解、甲磺酰化、胺化得到S-型利斯的明。

3.根据权利要求2所述的酵母菌生物拆分制备S-型利斯的明的方法，其特征在于：步骤(2)中用细胞培养液直接进行转化，底物浓度为1～10 g/L，转化温度为20～50℃，转化时间为5～50 h。

4.根据权利要求2或3所述的酵母菌生物拆分制备S-型利斯的明的方法，其特征在于：在转化体系中加入乙醇、乙腈或乙酸乙酯有机溶剂，有机溶剂加入量为底物重量的1～10%。

5.根据权利要求2所述的酵母菌生物拆分制备S-型利斯的明的方法，其特征在于：步骤(2)中用静息细胞在pH 5～10的缓冲液中进行转化，缓冲体系为Na₂HPO₄-柠檬酸、Tris-HCl Na₂HPO₄-KH₂PO₄、Na₂HPO₄-NaH₂PO₄或K₂HPO₄-KH₂PO₄，底物浓度为1～10 g/L，转化温度为20～50℃，转化时间为5～50 h。