[发明专利]一种活性物及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种活性物及其应用，属生物农药技术领域。

背景技术:

根结线虫是一种极难防治的植物寄生线虫。随着设施蔬菜栽培的迅猛发展，根结线虫的发生区域不断扩大，危害日益加剧。根结线虫有90余种，其中南方根结线虫（Meloidogyne incognita）是危害最为严重的根结线虫之一。南方根结线虫（M. incognita）属线虫门（Nematoda）、侧尾腺口纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、垫刃亚目（Tylenchina）、垫刃总科（Tylenchoidea）、异皮线虫科（Heteroderidae）、根结亚科（Meloidogyninae）、根结线虫属（Meloidogyne）。南方根结线虫（M. incognita）寄主范围广，受害后的植株根部形成大小不等的瘤状根，水分和养料运输受阻，导致植株营养不良，发病严重时整株萎蔫枯死，是一种极难防治的土传性病害。

现有南方根结线虫（M. incognita）病的防治方法包括化学防治、抗病育种、物理防治等，其中以化学杀线虫剂为主。随着化学药剂对环境所造成的污染，一些有效的杀线虫剂逐步被禁用，因此人们力求从自然界中寻找能防治南方根结线虫（M. incognita）病的天然药剂。微生物是产生活性天然产物的主要源泉之一，从微生物的代谢产物中寻找具有对南方根结线虫（M. incognita）有毒杀活性的天然产物成为一个研究热点。

发明内容:

本发明的目的在于提供一种活性物及其应用。

本发明是这样实现的：

1、活性发酵液的制备：

本发明使用的细菌菌株是变形杆菌（Proteus sp.）CD-126, 菌株CD-126已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.6357。

变形杆菌（Proteus sp.）CD-126保存在酵母提取物胰蛋白胨（LB）培养基（酵母提取物：5.0 g, 胰蛋白胨：10.0 g, 氯化钠：10.0 g , 水1000 ml, pH：7.0）中，使用时在LB的液体培养基中活化24小时。将活化后菌种100 μl接种于装有50 ml - 250 ml液体LB培养基三角瓶中，在温度为28-37℃，转速为120-180rpm的条件下培养96小时，即得到培养液。将培养液8500 rpm离心10分钟后，取上清放入4℃的冰箱中备用，得到本发明使用的活性发酵液。

2制备试验用的南方根结线虫（M. incognita）

番茄根系用于南方根结线虫（M. incognita）的制备。取发病严重的番茄根系，洗净后统计根结数量，放入水中浸泡过夜，收集浸泡液；同法再泡洗3次，弃去根系。残液和泥土经2000 rpm离心2 min，弃去上清液，加入494 g/L蔗糖，混匀后2000 rpm离心2 min，将上清液用800目的分离筛清洗，收集分离筛上的幼虫和虫卵。洗液再用100、200和500目的分离筛反复漂洗，收集500目分离筛上的收集物-大部分为虫卵；500目分离筛上的滤过液再经800目的分离筛清洗，收集分离筛上的虫体-2龄幼虫。所分离的虫和虫卵储于4℃的冰箱中备。

3. 实验方法

液体浸泡法：取5 ml稀释10倍的测试样品溶液、200 μl含有±200条线虫的悬液于直径为6 cm的培养皿中，轻轻混匀后将培养皿室温放置。在解剖镜下随机选择10个视野定时（6小时、12小时、24小时）进行观察，计数病虫数（以线虫不动作为标准）和总线虫数。每个测试样品设三个重复，并以未接种菌株的培养基为对照，得到测试样品对线虫的致死率，以致死率高低评定样品对线虫的毒力。

三格平板法：取5 ml发酵液于三格板一格中，其余两格各加入水琼脂，在水琼脂表面分别加入线虫（约100条）。在显微镜下定时（12 小时、24小时、48小时）进行观察，观察到的僵直针刺无反应线虫计为死虫，记下观察到的死虫数和总线虫数，计算各发酵液对线虫的致死率。每一处理重复三次，用等量LB培养基作为对照。

本发明的活性发酵液在制备毒杀南方根结线虫（M. incognita）生物农药中应用。

本发明对南方根结线虫（M. incognita）具有良好的毒杀作用，综合性状好，高效低毒的优点，能够作为制备生物农药杀线剂的应用，易于工业化生产。

具体实施方式：

下面用实施例来进一步详述本发明，但本发明的内容并不局限于此。