[发明专利]从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的工艺方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种从镰形棘豆中提取黄酮类活性物质的方法。

背景技术

镰形棘豆(Oxytropis falcata Bunge)系豆科棘豆属的多年生无茎草本植物，藏药称“莪大夏”、“大夏”、“达夏”，广泛分布于西藏、青海、甘肃南部、四川西部及新疆等地。具有抗炎止痛、清热解毒及止血等功效，内服可治流感、扁桃体炎、高烧、喉炎、气管炎、出血、便秘、炭疽等症以及藏医的黄水病，外敷治疗疮疖肿痛、创伤、骨伤疼痛。由于其突出的抗炎疗效，是藏医的“三大抗炎药”，并享有“草药之王”的美誉。在临床上使用广泛，是六味镰形棘豆散、九味青鹏散、十八味欧曲丸、棘豆消氧洗剂、青鹏膏剂、流感丸、奇正藏贴、奇正消痛贴等多种复方或成药的主要药味，是一味非常具有研究和开发价值的天然抗炎药物。

黄酮是镰形棘豆的主要活性成分之一，其生物活性主要集中于抗肿瘤、抗炎、抗氧化、镇痛、防治心血管疾病等方面，其中特别突出的是其显著的抗炎活性。通过系统的化学成分研究，目前已从镰形棘豆中发现黄酮类化合物60余种。乔松素（化学名5,7-二羟基二氢黄酮）和2’,4’-二羟基查尔酮是镰形棘豆中黄酮类的主要成分，在药材中的含量分别占到0.12%和0.27%，同时，这两种化合物也是医药、保健品的重要原料。

现有从镰形棘豆中制备黄酮的方法，工业生产上多是针对总黄酮，如采用水提取-盐酸水解工艺制备总黄酮苷元，采用大孔吸附树脂富集镰形棘豆水提取物中的总黄酮，所得产品中黄酮单体的含量低。制备黄酮单体的方法多是实验室方法，步骤繁琐，制备量低，多是毫克级。中国专利申请号NO.200910264515.1提供了一种制备黄酮单体2’,4’-二羟基查尔酮的方法，但该方法需要使用二氯甲烷有毒试剂，柱层析洗脱溶剂系统组成复杂，还需用特殊设备高效液相制备色谱仪进行纯化，且制备量低，难以实现规模化生产。

发明内容

为了克服现在技术的不足，本发明的目的是提供一种简单易行、安全可靠且适合工业化生产的同步制备高纯度乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，以特色藏药镰形棘豆为原料，通过乙醇加热提取、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀、普通硅胶和反相硅胶柱层析等步骤同时得到高纯度的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。所述方法无需应用二氯甲烷等有毒试剂，无需复杂的柱层析洗脱溶剂系统，也不需要高效液相制备色谱仪等设备。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取镰形棘豆，粉碎，用乙醇回流提取2～4次，各次提取液过滤，滤液经减压浓缩得总浸膏；

（2）总浸膏用水混悬，依次用石油醚萃取2～3次，乙酸乙酯萃取5～7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；

（3）乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱分离，先用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物；

（4）浓缩物用少量乙酸乙酯溶解，加入4～7倍石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3～5次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物；

（5）混合物用反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，分别获得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。

进一步地，上述方法中步骤（1）所述的乙醇为浓度为80~95%的乙醇。

进一步地，上述方法中步骤（5）所述的反相硅胶为C₁₈反相硅胶，甲醇为70～80%甲醇。

使用本发明方法制备的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮纯度均大于98%（高效液相色谱法测定），而且二者的产率和提取率均较高，乔松素的产率和提取率分别为0.08%和67.5%，2’,4’-二羟基查尔酮的产率和提取率分别可达0.24%和88.9%。本发明提出的方法工艺简单，且稳定可行，适合工业大生产。

本发明的有益效果在于：（1）可同时制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮，节省了生产原料，起到了综合利用的作用。（2）制备的产品纯度高，且产率和提取率也较高，适合工业生产应用。（3）整个制备过程，无需特殊设备，且避免了有毒试剂的使用。

具体实施方式