[发明专利]淋球菌抗原检测方法及检测试剂盒和该试剂盒的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及淋球菌抗原检测方法，以及用于该方法的检测试剂盒和该试剂盒的制备方法。

背景技术

淋病是目前国内最为常见的性传播疾病之一，其病原体为淋球菌，它是一种严重的人体寄生菌，存在于急、慢性尿道炎的脓性分泌物及新生儿眼结膜分泌物中。在男性常表现为尿道炎，尿道口可出现黄色脓性分泌物，而女性感染者症状常常不明显，但可以从尿道、阴道扩散到输卵管，引起不育症，新生儿经产道感染引起的眼结膜炎逐渐可涉及全眼，导致失明。感染淋球菌后，若不进行治疗，可出现角膜穿孔导致失明，也可导致输卵管狭窄、增厚、粘连、阻塞，从而引不孕或宫外孕，甚至通过血行将淋球菌播散到全身，出现较严重的全身感染，如淋球菌性败血症、关节炎、心内膜炎、脑膜炎等。因此，对淋病的早期诊断与治疗十分重要。

诊断男女病人淋病感染的方法，目前有几种不同的方法：1、培养法；2、免疫荧光法；3、合成酶链反应LCR检测方法；4、聚合酶链反应PCR检测方法。培养法是传统的诊断方法，取女性子宫颈分泌物或男性尿道的标本接种到培养板上，然后进行48～72个小时培养；对菌落进行染色，以观察菌落的形态和着色来判断。培养法虽然灵敏度高，特异性强，但方法工作量大，培养时间长，要求专门的设施和专业人员操作，而且对环境要求高，需要特殊仪器，在实际临床应用受到一定的限制。免疫荧光法和近来建立的合成酶链反应LCR和聚合酶链反应PCR检测方法均要求专门设施和掌握技巧的技术人员进行实验操作及判读结果，检测过程需要多步骤和数小时才能得出结果，而且需有相当大的测试标本数量才能达到可接受的成本效益比。

发明内容

    本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足, 提供一种检测速度快、操作简便，而且灵敏度高、特异性强的淋球菌抗原检测方法。

本发明还提供了一种用于检测淋球菌抗原的检测试剂盒。

本发明还提供了一种用于制备所述检测试剂盒的方法。

本发明所述淋球菌抗原检测方法所采用的技术方案是：该方法包括以下步骤：

     a、将胶体金标记的淋球菌抗体载于玻璃纤维载体上，并在与所述淋球菌抗体的载体相连的检测载体上包被有由所述淋球菌抗体制成的检测线和由免疫球蛋白G形成的控制线；

     b、取待测标本，所述待测标本裂解后滴于胶体金标记的淋球菌抗体的载体上，如有淋球菌抗体在所述检测载体上形成所述检测线和所述控制线，则为阳性，否则为阴性。

    所述淋球菌抗体为淋球菌单抗，或者为淋球菌多抗，或者为所述淋球菌单抗和所述淋球菌多抗的混合物。

本发明所述检测试剂盒所采用的技术方案是：所述检测试剂盒包括盒体及设置在所述盒体上的淋球菌抗原金标检测卡，所述盒体内存放有裂解液A和裂解液B，所述盒体上设置有与所述淋球菌抗原金标检测卡相适配的加样孔和观察孔，将样本滴于所述加样孔，然后从所述观察孔即可观察检测结果。

所述淋球菌抗原金标检测卡包括衬板，在所述衬板上从一个方向上依次设置有加样端吸水纸、检测层和吸水端吸水层，在所述检测层与所述加样端吸水纸之间搭接有淋球菌金标抗体层，所述淋球菌金标抗体层一端夹在所述加样端吸水纸内，在所述检测层上包被有检测线和控制线。

所述的检测层由硝酸纤维素膜、设在所述硝酸纤维素膜上的由所述淋球菌抗体构成的所述检测线和由免疫球蛋白G形成的所述控制线组成。

所述裂解液A为样品组织细胞分散剂溶液，所述裂解液B为淋球菌原生小体的胞液和胞质膜溶解液。

所述裂解液A为PPA或胆酸。

所述裂解液B为反应体系，其为BSA（牛血清白蛋白），或者为BSA-V（牛血清白蛋白-第五组份），或者为BSA和BSA-V的组合。

本发明用于制备所述检测试剂盒的方法所采用的技术方案是：首先制备所述金标抗体层、所述控制线的包被及所述检测线的包被，然后在所述衬板上组合淋球菌抗原金标试纸条，制成所述淋球菌抗原金标检测卡，再将所述淋球菌抗原金标检测卡装在所述盒体上，并在所述盒体内存放有裂解液A和裂解液B。

所述金标抗体层的制备方法包括下述步骤：

a、制备胶体金；

b、胶体金标记淋球菌抗体，在胶体金溶液中按0.6～1.0mg/ml加入淋球菌抗并搅拌；

c、经搅拌后再在溶液中加入胶体金稀释液和胶体金溶液的混合液；

d、将步骤c中的所述混合液经离心去掉上清液，得沉淀物；