[发明专利]一种植酸酶的检测方法

权利要求书

1.一种植酸酶的检测方法，其特征是利用羧基-氨基化学偶联法偶联分散型纳米微球和植酸分子，在溶剂相中形成植酸酶与植酸结合的表面快速反应体系，产物正磷酸直接进入溶剂相，而未反应的肌醇衍生物仍滞留于固相微球，通过低温和高速离心去除微球，在酸性条件下在溶剂相中加入显色剂生成蓝色复合物，在波长700nm比色测定，通过制定的标准曲线，最终换算成植酸酶活力单位。

2.根据权利要求1所述的植酸酶的检测方法，其特征是所述的分散型纳米微球为单分散羧基化聚苯乙烯微球，粒径<50nm，表面载基团为羧基。

3.根据权利要求2所述的植酸酶的检测方法，其特征是所述的利用羧基-氨基化学偶联法偶联分散型纳米微球和植酸分子是将单分散羧基化聚苯乙烯微球用碳化二亚胺活化20~40min，然后加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺反应15min使微球形成稳定的活泼酯中间体，再加入植酸钠30℃温育1-2小时，洗涤后收集偶联植酸分子的纳米微球；其中所述的单分散羧基化聚苯乙烯微球、碳化二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺以及植酸钠的用量为1g：0.01~0.1mol：0.005~0.1mol∶0.001~0.01mol；优选1g：0.05mol：0.01mol∶0.002mol。

4.根据权利要求1所述的植酸酶的检测方法，其特征是分散型纳米微球和植酸分子偶联后，在37°C、pH5.0条件下加入植酸酶样品进行反应，未反应的肌醇衍生物仍滞留于固相微球；通过4℃低温和高速离心20~30min去除微球，于酸性条件下在溶剂相中加入显色剂生成蓝色复合物，在波长700nm比色测定。

5.根据权利要求1或4所述的植酸酶的检测方法，其特征是采用植酸酶纯蛋白为标准样品，测定标准曲线，然后再根据样品比色值结果测算实际植酸酶含量。

6.根据权利要求1或4所述的植酸酶的检测方法，其特征是所述的高速离心为15,000×g。

7.根据权利要求1或4所述的植酸酶的检测方法，其特征是酶活力单位定义：在37°C、pH4.5~5.5条件下，每分钟从5mM的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷所需要的酶量定义为1个酶活力单位。