[发明专利]一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法及其试剂盒和引物

权利要求书

1.一种检测克罗诺杆菌属菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待检样品的基因组DNA，以其为模板，以克罗诺杆菌属特异性扩增引物对为引物，进行PCR扩增，所述的引物对中，一条引物的序列为SEQ ID NO.1所示，另一条引物的序列为SEQ ID NO.2所示；和

（2）检测438bp位置单一扩增产物的存在。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述PCR中，PCR的反应体系为：1×PCR反应缓冲液，10-15mmol/L  Mg²⁺，0.2-0.3mmol/L dNTP，0.1-0.3μM引物1，0.1-0.3μM引物2，Taq酶0.01-0.1U/μL，DNA模板10-100ng/μL。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述PCR中，PCR的反应体系为：1×PCR反应缓冲液，12.5mmol/L Mg²⁺，0.25mmol/L dNTP，0.2μM引物1，0.2μM引物2，Taq酶0.04U/μL，DNA模板40ng/μL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述PCR中，PCR的扩增程序为：92-95℃预变性3-6min，之后开始以下循环，每个循环的程序为：92-95℃变性20-40s，60-65℃退火20-40s，70-74℃延伸20-40s；循环共30-40个；循环结束后，70-74℃延伸8-12min，降温至4-15℃，结束。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述PCR中，PCR的扩增程序为：94℃预变性5min，之后开始以下循环，每个循环的程序为：94℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸30s；循环共35个；循环结束后，72℃延伸10min，降温至12℃，结束。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的检测方法为琼脂糖凝胶电泳检测法。

7.一种检测克罗诺杆菌属菌株的试剂盒，其特征在于，其包括一条序列为SEQ ID NO.1所示的引物和一条序列为SEQ ID NO.2所示的引物。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括10×PCR缓冲液，Taq酶，dNTP溶液和MgCl₂。

9.一种扩增克罗诺杆菌属菌株的引物，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1所示或者如SEQ ID NO.2所示。