[发明专利]一种口腔粘膜渗出液快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种口腔粘膜渗出液快速检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

人们已经开发了许多定性或定量检测生物体组织和流体中各种分析物的分析方法。如一种诊断口腔疾病的试剂，选用孟加拉红为染色剂，其与肿瘤细胞DNA多聚酶有亲和力，其着色对口腔癌的诊断有特异性，其着色深浅度能鉴别口腔癌和癌前损害，制备出孟加拉红口腔癌诊断试剂由以下原料构成：碳酸氢钠、甲醛或乙醇、孟加拉红、蒸馏水，均按一定比例配制。

一种人唾液中变形链球菌和茸毛链球菌的检测方法，首先是设计引物，所提供的套式聚合酶链式反应包括二次PCR，4对引物，变形链球菌两对正反引物和茸毛链球菌两对正反引物；其次是细菌染色体DNA及唾液染色体DNA提取；第三是第一次PCR，依次加入两对引物，四种dNTP混合物及模板DNA和Taq酶；第四是第二次PCR，将第一次PCR产物稀释，加入另外两对引物，进行扩增；第五是电泳。

收集口腔唾液用于检测带来相对较少的隐私侵犯，其相对安全，并可相对容易地快速完成。

尽管通过上述检测试条的分析法具有直接、快速且不需要复杂步骤的优点，但对于检测对象而言，在整个检测过程中都要咬合检测试条是不方便的。

发明内容

本发明的目的是提供一种口腔粘膜渗出液快速检测方法，一种简单、方便且有成本效益的用侧向免疫层析试条的口腔粘膜渗出液收集方法，其适于灵敏和快速地检测口腔粘膜渗出液中分析物。

一种口腔粘膜渗出液快速检测方法，含有以下步骤；

首先，通过轻轻地倒转瓶子约3次来混合样品缓冲液（以pH7.2+/-0.2磷酸钾缓冲的0.15M氯化钠、0.l% Triton X-100、15%热灭活鸡血清、30μg/ml亲合素、0.2% Tween 80、0.2% Tetronic T-904和0.0285%（活性成分）ProClin 950）；

从瓶子取下瓶盖并将缓冲液充填到滴管中至刻线；

将滴管的口腔粘膜渗出液分配至试管中；然后取下一支由包所提供的洁净拭子；

抓住拭子手柄，避免触及拭子的织物端；

随后，施加适当压力并轻柔地以拭子织物端来回地擦拭上齿龈线。在口的一角开始轻柔而缓慢地擦拭直至到达口的另一角，然后沿上齿龈线擦拭返回出发点，时间为5-6秒；

然后转动拭子以使用拭子的另一侧擦拭下齿龈；

使用拭子的另一侧轻柔而缓慢地来回擦拭下齿龈线；

在口的一角开始，在口的另一角结束，然后沿下齿龈线擦拭返回出发处，时间为5-6秒；

立即将拭予放于盛有样品缓冲液的管中；

紧握拭子手柄，将拭子往复插入样品缓冲液管中6-8次，靠住管壁摩擦拭子的两侧；从管中取出拭子；

口腔粘膜渗出液现在已准备好用于检测；

转移200μl此口腔粘膜渗出液到空试管；

将使用以下的测定试条检测此试样；

如果要对口腔粘膜渗出液进行多于一个检测试条的检测，可将多个200μl试样转移到单个空试管；

打开装有测定试条的罐；从罐中取出一个测定试条并立刻重新盖好罐；

避免用手触及试条中央的膜表面；

将测定试条置于含有200μl稀释标本的管中，使测定试条上的箭头指向下；

将计时器设定为20分钟，或记录将测定试条加至样品的时间；

20分钟以后读取检测结果；

然后将试条、管和拭子弃于生物危险品废物容器中。

本发明的优点是可容易地快速用于许多病症的诊断，这些病症需要对唾液中的分析物进行免疫检测，特别容易使用本发明的概念用于性传播疾病检测，比如丙肝抗体和乙肝抗体。

具体实施方式

显然，本领域技术人员基于本发明的宗旨所做的许多修改和变化属于本发明的保护范围。

实施例1：

使用本领域技术人员所知的方法，适用于本发明的测定试条可从任何来源包括天然，化学合成或重组生产而获得。例如，优选的SEQ ID No.1至5的肽部分可使用固相肽合成技术化学合成，或通过可操作性将编码期望肽的核酸连接到表达栽体中并在合适宿主中表达所述核酸而进行重组生产。一旦分离，可使用已知技术将所述肽生物素化。

可使用任何本领域技术人员所知的方法将合适的抗原固定到基质，所述方法不破坏抗原对靶抗体的特异性结合。

对于吸水性基质，使用本领域技术人员公知的技术，通常在封闭之前将复合物的链亲合素偶联到基质。