[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其筛选培养方法和用于豆粕的处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌及其筛选培养方法和用于豆粕的处理方法，属于微生物技术和发酵工程领域。 

背景技术                

豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品，其粗蛋白含量高，氨基酸组成平衡，营养价值较高。豆粕还含有其他丰富的营养物质，如1％-2％的脂肪，10％-15%的碳水化合物，多种矿物质和维生素以及动物体内必需的氨基酸等，营养成份比较齐全且平衡。豆粕是目前应用最广泛的蛋白质饲料。(王春林等，2000；丁斌英等，2001)。但是，豆粕中含有大量的非淀粉多糖(Non-starch polysaccharides，NSP)，大豆抗原蛋白和胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子，这些抗营养因子的存在一方面抑制动物体内某些消化酶，或与营养物质络合成不易消化的成分，使得豆粕的消化率和动物的吸收率下降；另一方面还会破坏动物体内的某些器官（李素芬，杨丽杰，1999），对动物的生理、生长、健康造成不良的影响（徐良梅，秦贵信，1999，2001）。研究表明，常规的处理方法，如通过加热、挤压、浸提等难以去除豆粕中抗营养因子，因此，如何消除抗营养因子对动物生产的影响一直是人们关注的焦点（Anderson，1992；Damagalski等，1992；Hong K J等，2004）。消除豆粕中抗营养因子，一般是减少抗营养因子的含量或是降低或钝化其活性。国内外一直在研究这些抗营养因子的去除方法，目前主要有物理、化学、育种、生物技术等多种途径。物理钝化方法主要是利用抗营养因子的热不稳定性，所以对热稳定的抗营养因子是无效的；化学钝化方法主要改变抗营养因子的分子结构，破坏其二硫键，这种方法的缺点是有化学物质残留；植物育种方法可从根本上去除抗营养因子，但因为抗营养因子是植物的防御物质，降低含量会给植物本身带来副作用；微生物发酵法主要是利用微生物分解、利用抗营养因子，使一些成分改变，原来动物不能消化吸收的营养物质变得可以被消化利用吸收，提高蛋白质生物转化率，因微生物发酵法工艺简单，产品营养性好，目前被广泛应用与工业生产中（熊智辉等，2007）。目前采用发酵法消除豆粕抗营养因子，采用的都是多菌种混合固态发酵的方式。枯草芽孢杆菌是豆粕发酵必用的菌种之一，因为：1）枯草芽孢杆菌是农业部规定允许在饲料中使用的安全菌株；2）枯草芽孢杆菌具有较好的蛋白酶活性，能较好分解豆粕蛋白质类抗营养因子；3）枯草芽孢杆菌具有生长快、耐干燥、耐高温等优点。因此筛选适合豆粕发酵的高效枯草芽孢杆菌，是豆粕的发酵处理技术的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌及其筛选培养方法和用于豆粕的处理方法，筛选及培养出的枯草芽孢杆菌BZD-B9生长速度快，在豆粕固态发酵中能提高豆粕蛋白质水解度和TCA-N含量,促进豆粕抗营养因子分解，可抗杂菌生长，稳定发酵豆粕品质，能代替鱼粉等动物蛋白质，减少动物疾病，促进健康养殖，提高产品安全性。枯草芽孢杆菌BZD-B9筛选方法、培养方法和用于豆粕的处理方法操作简便，成本低，产品质量稳定可靠，效率高。 

本发明枯草芽孢杆菌的技术方案是： 

一种枯草芽孢杆菌，其分类命名为：枯草芽孢杆菌 BZD-B9 (Bacillus subtilis BZD-B9)，保藏日期为：2012年10月19日，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏中心保藏编号为：CCTCC NO: M 2012418；所述枯草芽孢杆菌BZD-B9，其形态及生理生化特征主要是：1）在LB培养基上，初时菌落为乳白色，表面有皱褶，边缘不规则，经培养一段时间后菌落呈淡红色；2）菌体镜检结果为杆状菌，可形成芽孢，为革兰氏阳性菌。 

所述的枯草芽孢杆菌BZD-B9，其主要生理特性为：有淀粉分解能力，能还原硝酸盐，具有明胶液化能力，能利用柠檬酸盐，V-P试验、接触酶试验和甲基红试验均呈阳性。 

本发明枯草芽孢杆菌筛选方法的技术方案是： 

一种枯草芽孢杆菌的筛选方法，其步骤包括：以豆粕为基质，埋于土壤中，再经若干天富集，最后分离纯化而获得枯草芽孢杆菌BZD-B9。

本发明枯草芽孢杆菌培养方法，其步骤包括：先将枯草芽孢杆菌BZD-B9在培养基上培养一段时间，然后观察培养基上的菌落形态，或对形成的芽孢进行检测，最后获取经过培养的枯草芽孢杆菌BZD-B9。 

枯草芽孢杆菌培养方法进一步的技术方案是：