[发明专利]P450sca-2酶突变体、其制备方法和应用

权利要求书

1.一种分离的多肽，其是SEQ ID NO:1所示的P450sca-2酶的变体或所述变体的生物学活性片段，

其中所述多肽在对应于SEQ ID NO:1所示序列中的G52、F89、P159、D269、T323和E370位置上包括氨基酸取代，而且

相对于SEQ ID NO:1所示的P450sca-2酶，所述多肽在宿主细胞中表达时赋予所述宿主细胞提高的在含十氢萘环化合物的十氢萘环的6β位引入羟基的能力。

2.权利要求1的分离的多肽，其中所述氨基酸取代为G52S、F89I、P159A、D269E、T323A和E370V，且所述多肽包括SEQ ID NO:2所示的序列。

3.权利要求1或2的分离的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列进一步包括在对应于SEQ ID NO:1所示序列中的选自T119、N363、T85、V194和它们任意组合的位置上的氨基酸取代。

4.权利要求3的分离的多肽，其中所述N363位置的氨基酸取代为N363Y或N363H；所述T119位置的氨基酸取代为T119S、T119C或T119N；所述V194位置的氨基酸取代为V194C、V194N或V194T；且所述T85位置的氨基酸取代为非极性疏水氨基酸。

5.权利要求4的分离的多肽，其中所述T85位置的氨基酸取代为T85M、T85L、T85F或T85I。

6.权利要求3的分离的多肽，其中所述氨基酸取代为T119N、N363Y、T85I和T194T。

7.权利要求3的分离的多肽，其中所述氨基酸取代为T119S、N363Y、T85F和T194N。

8.一种分离的多肽，其包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：

i)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16；

ii)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性的氨基酸序列；或

iii)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列相比经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列；而且

所述多肽在宿主细胞中表达时赋予所述宿主细胞提高的在含十氢萘环化合物的十氢萘环的6β位引入羟基的能力。

9.权利要求1或8所述的分离的多肽，所述含十氢萘环的化合物为他汀类药物，优选美伐他汀。

10.权利要求1或8所述的分离的多肽，所述宿主细胞是原核微生物，所述原核微生物优选自以下组中：大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、自养假诺卡氏菌(Pseudonocardia autotrophica)、小四孢菌(Microtetraspora)和嗜碳链霉菌(Streptomyces carbophilus)。

11.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-10之一所述的分离的多肽的核苷酸序列。