[发明专利]极暗黄链霉菌

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物技术领域，具体指一种对农作物病具有广谱拮抗作用，尤其对水稻纹枯病具有明显抑制作用的极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）CZB40。

背景技术

水稻纹枯病是由立枯丝核菌(Rhzioeotniasoalni)引起的导致水稻减产的重要病害，可造成10%-30%的产量损失，发病严重时减产可达50%。近几年，随着高产杂交稻品种的推广，施氮水平的提高，水稻复种指数的上升，水稻纹枯病的危害越来越严重。目前我国水稻纹枯病的防治主要以井冈霉素与一些化学药剂为主，长期单一使用井冈霉素易导致立枯丝核菌产生抗药性，近年井冈霉素每季用药次数已从20年前2次增加到现在的3-5次，用药量也从1.5 kg/hm²上升到4.5-6.0kg/hm，而化学药剂存在毒性、残留、环境污染等缺点，且由于立枯丝核菌腐生能力强和寄主范围广的特点，国内外至今尚未发现对该病的高抗品种。

且，随着化学杀菌剂对生态环境、有益生物及人体所引致负作用的加大，以及植物病原菌日益增加的抗药性，利用一些生物防治菌作为生物杀菌剂来防治植物病害，以减轻化学农药对环境污染的研究引起各界的密切关注。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种对农作物病具有广谱拮抗作用的极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）CZB40，尤其对水稻纹枯病菌具有良好的抑制效果。

本发明所述的极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）CZB40，已于2012年12月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2012519，保藏地址：中国武汉武汉大学。

本发明菌株CZB40具有以下性质：

形态特征：使用插片法在高氏1号培养基上28℃培养7d后，分别用光学显微镜和电子显微镜观察发现，本菌株具有典型的链霉菌属特征，菌落紧密、表面皱折，皮壳状，青褐色。气生菌丝和基内菌丝均很丰富，在扫描电镜下观察发现，气生菌丝体形成孢子链时，孢子丝呈螺旋状，孢子呈短圆柱形，见图1。

生理生化特性：本发明菌株CZB40在高氏一号固体培养基中生长产生暗黄色色素。本菌株能分解利用纤维素，使明胶液化，使淀粉水解，能使牛奶胨化，但不能使牛奶凝固，也不能产生硫化氢。

利用参照I.M. Kauffmann等及Jasmina Nikodinovic等的方法提取本发明菌株的基因组DNA，根据放线菌16SrDNA的结构特点及其保守区设计特异引物（引物由上海生工生物工程公司合成）：

正向引物16sF：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG（见SEQ ID NO.1）；

反向引物16sR：AAGGAGGTGATCCAGCCGCA（见SEQ ID NO.2）。

以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增（50μL反应体系）：94℃预变性5min，94℃变性1min，56℃复性1min，72℃延伸2min，25个循环，72℃延伸8min。扩增产物经上海生工生物工程技术有限公司测序，序列经BLAST分析并构建系统发育树（见图2）表明，本发明菌株CZB40与极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）的相似性达99%。结合形态和生理生化特征分析，将其鉴定为极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）的一个新种，命名为极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）CZB40。

培养及发酵条件

培养基中的营养源并无特殊的规定，培养基中可含有常用于微生物培养的碳源、氮源及其他营养源。其中，碳源可为葡萄糖、麦芽糖、马铃薯淀粉、可溶性淀粉、玉米粉、大米粉、蔗糖等。氮源可为NaNO₃、(NH4)₂SO₄、酵母粉、蛋白胨、大豆粉等。其他营养源可为含镁、钠、钾之类的金属盐等。对温度、时间等培养条件并无严格的限制，以适于本发明菌株的生长为宜。