[发明专利]一种乳制品中叶酸含量的检测方法

权利要求书

1.一种乳制品中叶酸含量的检测方法，该方法包括如下步骤：

(1)样品前处理：取乳制品样品，配制成水溶液，超声波振荡萃取，加入高氯酸沉淀蛋白质，离心，过滤，滤液备用；

(2)固相萃取净化：利用固相萃取柱对步骤(1)得到的滤液进行净化，以除去其中的干扰物质，收集过柱后的样品，氮气吹干，备用；

(3)衍生：将步骤(2)得到的样品用水溶解，加入过氧化氢水溶液、氢氧化钠水溶液和水，混匀后加热处理，然后水洗冷却得到衍生样品；

(4)色谱检测：使用C18色谱柱对步骤(3)得到的衍生样品进行检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述乳制品为液态乳制品或乳粉，步骤(1)中是取乳制品样品调配成固形物含量0.1～0.2g/ml的水溶液。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(1)中配制的乳制品样品溶液先在30～50℃下超声波萃取10～20min，再加入50％～60％浓度的高氯酸沉淀蛋白质，沉淀完全后4000r/min离心15min，过滤，滤液备用。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述固相萃取柱为C18固相萃取小柱。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述固相萃取净化步骤中，先用甲醇活化萃取柱，取5mL～10mL样品清液加到柱床上，用固相萃取仪控制流速在40d/min，使样品流过填料；待样液全部通过固相萃取柱后，用5～10mL去离子水将干扰物洗出；再用5～10mL 甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，保存备用。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其中，所述衍生步骤中，用1mL水复溶经氮气吹干的样品，向复溶后的样品中加1～3mL的体积百分比浓度为5％～20％的过氧化氢溶液衍生剂、1～3mL的0.05～2mol/L的氢氧化钠和1～3mL的去离子水，混匀，然后加热处理使样品中的叶酸在碱性条件下与过氧化氢发生衍生反应，冷却，用有机系针头式滤膜过滤到自动进样瓶中，上机备用。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述加热处理为在60℃下加热40～50min；或者为先在30～50℃下加热30～60min，再升温至50～70℃加热30～60min。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述色谱检测条件为：色谱柱BDS HYPERSILC18，柱体积250×4.6mmi.d.5μm；柱温为30℃；检测器为荧光检测器，检测波长Ex为285nm，Em为437nm；流动相为含乙腈15％的0.05mol/L磷酸二氢钠溶液；流速1mL/min；进样量20μL。