[发明专利]一种用于诱导分化间充质干细胞的培养基及其方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种用于诱导分化间充质干细胞的培养基及其方法。 

背景技术

干细胞作为形成机体各种组织器官的始祖细胞，在特定条件下具有自我复制和多向分化能力，因此干细胞研究具有为大量严重疾患和损伤带来新型治疗方法的无限潜力。 

间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是干细胞研究的一个重要分支，最先在骨髓中被发现，因此被统称为骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs），后来相继在脐带、脂肪组织和皮肤等多种结缔组织和器官间质中被发现。 

间充质干细胞具有多向分化能力，在一定诱导条件下具有向成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、肌腱细胞、脂肪细胞及基质细胞等中胚层细胞分化的能力；同时还可以向外胚层的神经元细胞和内胚层的肝卵圆细胞分化。已有多项研究表明，把MSCs植入体内，可向多种造血以外的组织如心、脑、肺、骨、软骨和皮肤等处定位并分化为相应的组织细胞。可见，MSCs在移植中有着极其重要的应用价值，一方面可以替代坏死细胞发挥生理功能，另一方面分泌特定的细胞因子和介质，能够动员体内干细胞，进行组织修复。因此，MSCs及其衍生物成为当今临床移植治疗难治性疾病主要选择的细胞种类。 

对于MSCs定向分化机制的研究仍处于探索阶段，筛选并总结近年来的相关文献发现，应用于间充质干细胞分化为神经样细胞的方法主要有: (1)细胞生长因子法：NGF、EGF、bFGF、低浓度TNF-α等；(2)化学诱导剂法：β-巯基乙醇、二甲基亚砜、丁化羟基苯甲醚、3-叔丁基-4-羟基茴香醚、维甲酸、等；(3)生长因子与化学诱导剂联合；(4)其他：创伤性脑组织匀浆、脑组织上清液、脱细胞神经移植物、与神经细胞、神经干细胞或视网膜色 素上皮细胞共培养或用接近生理状态的条件培养基、基因转染、传统中药黄芩苷、红景天苷、川芎嗪、丹参、天麻、人参等。 

理想的移植细胞应具有创伤小，易于获得，易于体外扩增，移植体内可成活并具有相应的功能，不涉及免疫排斥致瘤性及伦理学问题等。上述常用的化学诱导剂虽可以快速诱导生成神经样细胞，但存在细胞活力差，平均4天出现死亡或凋亡，而细胞生长因子诱导法存在诱导效率低下，诱导周期长，且存活时间短等缺陷，甚至有些文献认为神经因子诱导法生成的神经样细胞，仅仅形态上像神经细胞，并不具备神经细胞的功能。多种方式的联合诱导法也不能避免上述缺陷。与各种细胞和脑组织液共培养诱导法存在细胞采集复杂或异体异种蛋白产生免疫排斥及传播疾病的缺点。 

因此，针对现有技术存在的缺陷，需要进行改进，从而建立临床级间充质细胞和由其衍生的神经前体细胞移植技术平台。 

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种用于诱导分化间充质干细胞的培养基。 

本发明的另一个目的是提供一种诱导分化间充质干细胞的方法。 

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。一方面，本发明提供一种诱导分化间充质干细胞的培养基，所述培养基为在基础培养基中添加了以下成分：10~30ng/mL脑脊液。 

优选地，所述基础培养基中包括以下成分：氨基酸、维生素、无机盐和其他成分。

优选地，所述氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸及其盐、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸中的一种或多种。 

优选地，所述维生素选自维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、氯化胆碱、泛酸钙、叶酸、烟酰胺和肌醇中的一种或多种。 

优选地，所述无机盐选自氯化钙、硫酸铜、硝酸铁、硫酸铁、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和硫酸锌中的一种或多种。 

优选地，所述其他成分选自葡萄糖、次黄嘌呤、亚油酸、硫辛酸、四 甲烯二胺、丙酮酸钠、植物血球凝集素中的一种或多种。 

优选地，所述脑脊液与待诱导分化的间充质干细胞来源于同种哺乳动物，例如人。

优选地，所述脑脊液与待诱导分化的间充质干细胞来源于同一哺乳动物个体，例如同一人体。优选地，所述脑脊液在干细胞移植进行腰穿鞘内治疗时获得，属自体的。 

本发明还提供了上述培养基在将间充质干细胞诱导分化为神经前体细胞中的应用。