[发明专利]一种壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法有效
申请号: | 201210562596.5 | 申请日: | 2012-12-21 |
公开(公告)号: | CN103030813A | 公开(公告)日: | 2013-04-10 |
发明(设计)人: | 赵晓丽;吕维加;潘浩波;岳建辉 | 申请(专利权)人: | 深圳先进技术研究院 |
主分类号: | C08G81/00 | 分类号: | C08G81/00;C08B37/08;C08G73/04;C12N15/87 |
代理公司: | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人: | 张全文 |
地址: | 518055 广东省深圳*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 聚糖 接枝 聚乙烯 亚胺 病毒 转基因 载体 制备 方法 | ||
1.一种壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
获得巯基化聚乙烯亚胺和巯基化壳聚糖;
将所述巯基化聚乙烯亚胺和巯基化壳聚糖进行氧化反应,形成二硫键,获得所述壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体。
2.根据权利要求1所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述巯基化壳聚糖的分子量为5kDa~100kDa,所述巯基化聚乙烯亚胺的分子量为800Da~1800Da。
3.根据权利要求1所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述巯基化聚乙烯亚胺的巯基与聚乙烯亚胺的摩尔比为1:1。
4.根据权利要求1所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述巯基化壳聚糖的巯基与壳聚糖的摩尔比为1:1~4:1。
5.根据权利要求1所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述巯基化聚乙烯亚胺的制备方法包括如下步骤:
将聚乙烯亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯反应,获得硫代聚乙烯亚胺;
向将所述硫代聚乙烯亚胺中加入还原剂还原,获得所述巯基化聚乙烯亚胺;
所述巯基化壳聚糖的制备方法包括如下步骤:
将壳聚糖与N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯进行反应,获得硫代壳聚糖;
向将所述硫代壳聚糖中加入还原剂还原,获得所述巯基化壳聚糖。
6.根据权利要求5所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述还原剂为二硫苏糖醇、2-巯-乙醇和巯基乙酸中的至少一种。
7.根据权利要求5所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯与聚乙烯亚胺的摩尔比为8:2.8,所述N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯与壳聚糖的摩尔比为4:1~32:1。
8.根据权利要求1所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述氧化反应的时间为2~6天。
9.根据权利要求1所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法,其特征在于,所述巯基化聚乙烯亚胺和巯基化壳聚糖的摩尔比优选为2.8:1~23:1。
10.根据权利要求1~9任一所述的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体的制备方法获得的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺非病毒转基因载体在基因转染中的应用。
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