[发明专利]棘孢肽类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及棘孢肽类化合物及其制备方法；本发明还涉及该化合物在抗肿瘤剂中的用途。

背景技术

棘孢肽类化合物（peptaibol）主要是来源于木霉属的一类活性线性小肽，常被报道具有抗菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫等活性，并且C端与N端同时乙酰化的棘孢肽十分罕见。本发明人研究得知，棘孢木霉(Trichoderma asperellum) (2012年10月31日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC M 2012438)液体发酵产物的粗提物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现棘孢肽类化合物具有抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种棘孢肽类化合物及其制备方法和用途，该化合物具有抑制肿瘤细胞增殖作用，具有抗肿瘤活性。其结构式为：

    其结构特征是：含有六个甲基丙氨酸残基、一个缬氨酸残基、一个异亮氨酸残基、一个丝氨酸残基，并且C端与N端同时乙酰化。

本发明还提供了所述化合物的制备方法：发酵培养棘孢木霉(Trichoderma asperellum)，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。 

所述棘孢木霉(Trichoderma asperellum) 为棘孢木霉(Trichoderma asperellum) IBPT-2，已于2012年10月31日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC M 2012438。

本发明还保护了所述的化合物在制备细胞增殖抑制剂中的用途。及该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明的显著优点：研究所示棘孢肽类化合物属于活性线性小肽，并且是罕见的C端与N端同时乙酰化。所述棘孢肽类化合物具有抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

具体实施方式

在如下的实施例中所指的化合物的化学结构：

实施例1该化合物的发酵生产及分离精制

1发酵生产

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取棘孢木霉(Trichoderma asperellum) IBPT-2 (2012年10月31日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC M 2012438) 适量，接种到PDA固体斜面培养基上在28摄氏度培养箱中培养4天。

取斜面培养4天的棘孢木霉(Trichoderma asperellum) 适量，接种到装有400mL培养液 [ 培养基组成(克/升)：甘露醇20.0，酵母膏3.0，麦芽糖20.0，味精10.0，葡萄糖10.0，KH₂PO₄ 0.5 ，MgSO₄ 0.3，海水 ] 的1000mL锥形瓶中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液。

2 浸膏的获得

 用纱布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液与乙酸乙酯1:2萃取两次，萃取液减压蒸馏至干，得到发酵液的乙酸乙酯浸膏。

3 化合物的分离精制 

浸膏用100-200目硅胶拌样后，以石油醚：二氯甲烷：甲醇梯度组分为洗脱液，通过300-400目硅胶进行减压硅胶色谱柱层析，得到5个组分（A-E）。收集组分B (二氯甲烷-甲醇20:1洗脱物)，以石油醚：二氯甲烷：甲醇梯度组分为洗脱液，通过加压硅胶柱层析，得4个组分（B1-B4）。收集组分B3（二氯甲烷-甲醇为20:1的洗脱物）通过氯仿-甲醇(1:2)为溶剂进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，再经过RP-18反相硅胶柱层析以甲醇-水(3:2)为溶剂洗脱，最后通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250 mm，5μm)：分离流速为5 mL/min，流动相为50%乙腈水溶液，得到所示化合物。