[发明专利]一种快速测定食品中生物胺的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速测定食品中生物胺的方法，属于食品分析和安全技术领域。 

背景技术

生物胺是一类含氮的低分子量碱性有机化合物；含有蛋白质和氨基酸的食品，在一定条件下经过发酵或生化反应便可产生生物胺。目前已发现水产品、肉制品、乳制品、葡萄酒、啤酒、蔬菜、水果、干果和巧克力等食品中均含有多种生物胺。过量的生物胺被证明对人体会产生一些不良的生理反应，在食品保藏学中，生物胺往往是在食品腐烂或发酵过程中产生；食物中毒的发作和某些毒理学特性与组胺和酪胺有密切联系。 

美国 FDA 通过对爆发组胺中毒大量数据的研究，确定组胺的危害作用水平为：500mg/kg 食品。欧美及我国已经对部分食品中组胺含量做了限量要求，美国 FDA 要求进口水产品组胺不得超过 50mg/kg；欧盟规定鲭科鱼类中组胺含量不得超过 100mg/kg；其它食品中组胺不得超过100mg/kg，酪胺不得超过 100~800 mg/kg。其它胺类的控制也逐步提上议事日程，我国2008年出台了相关标准对于食品中生物胺的限量提出了要求，主要涉及色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺，液体样本中一般要求小于10 μg/kg，固体样本中一般要求小于50 μg/kg。 

目前食品中生物胺的检测一般采用高效液相色谱（HPLC），毛细管电泳(CE)，生物传感器等方法。这些方法均有一定的应用，也各有优缺点；如最常用的RP-HPLC法，一般认为其具有检测灵敏度高、定量分析准确和柱效高等优点，且有多个标准方法基于该技术实施；但是该方法需要高效液相色谱，且仪器预热平衡和分析等过程时间较长，速度较慢，灵活性较差。CE因无需对样品进行衍生化处理，且具有灵敏度较高、分离速度快、成本较低、无环境污染等优点；但是相对而言对于一些中性物质较难分离，且检测限相对较高。生物传感器由于其具有在线监测的能力被推崇，但是现有技术仍不是非常成熟，市场较少有可靠的成套装备，且价格较昂贵。 

因此在食品加工和流通等环节迫切需要一种无需昂贵的分析仪器，费用低，操作简便、快捷，检测限能够达到ng级别，能够满足现场快速检测的需要的方法，切实保障食品安全。 

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术中的缺点，提供一种快速测定食品中生物胺的方法，本发明设计巧妙、易操作、成本低、速度快、适于大规模应用。 

为了实现上述目的，本发明的技术方案：一种快速测定食品中生物胺的方法，包括以下步骤： 

（1）食品样品中生物胺的提取：取2-50g食品样品，用水、酸性或有机相介质中提取食品样品中生物胺，提取两次；最终用5%的三氯乙酸稀释至100mL；

酸性介质选用HCl、HClO₄、TCA中的一种，酸性介质的浓度在0.1mol/L-1mol/L；有机相介质选用甲醇、丙酮、乙腈-高氯酸、二氯甲烷-高氯酸中的一种或几种复合； 

根据不同的样品采取不同的介质提取，针对奶制品和豆制品较佳的采用0.1mol/L-1mol/L的盐酸提取或采用乙腈-高氯酸提取；针对肉类、水产等较佳的采用0.1mol/L-1mol/L高氯酸或三氯乙酸提取，也可采用二氯甲烷－高氯酸提取；最终用5%的三氯乙酸稀释至100mL。

（2）生物胺提取液的净化，首先用等比例的正己烷萃取脱去脂肪，然后进行液-液萃取；基本步骤：样品液或样品提取液先用盐饱和，较佳的采用NaCl、Na₂CO₃、Na₂SO₄中的一种或几种，然后调 pH 至碱性。最后用有机溶剂萃取，较佳的有机溶剂指的是正丁醇、氯仿、异丁醇、异戊醇和乙醚中的一种或几种。最后氮气吹干并加入0.1mol/L的盐酸溶解残留物。有机溶剂的选择和配比必需按照产品的特性进行。 

（3）生物胺提取液衍生化：将净化后的提取液用衍生剂进行衍生以利于紫外检测，将衍生剂加入到1mL净化后的提取液中，衍生剂与提取液的体积比在1︰20－1︰3之间，然后在40-70℃下反应30min，然后加入2ml超纯水，40℃氮气除去配制衍生剂所带入的丙酮。加入6ml乙醚进行萃取，获得的有机相用氮气吹干，加入1mL甲醇，过滤后待用。 

较佳的衍生剂为丹磺酰氯、邻苯二甲醛、苯甲酰氯、9-芴基甲基-氯甲酸酯和苯基异硫氰酸盐中的一种；