[发明专利]高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法

权利要求书

1.一种高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

一、菌株的处理与富集，取海水、污水适量接种至富集培养基中，富集培养基于35℃，170r/min振摇24h，制得富集菌液；

二、菌株的初步筛选，分别取适量所述富集菌液接种于脱脂奶粉平板培养基上，分别于35℃培养48h后观察；

三、菌株的复筛，取初筛后的菌株接种种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液，采用改良Lowry法检测蛋白酶活力。

2.根据权利要求1所述的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤一中的富集培养基由蛋白胨5g/L，酵母膏1g/L，磷酸高铁0.1g/L，琼脂20g/L，及海水配制而成，pH值为7.6。

3.根据权利要求1所述的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤二中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板。

4.根据权利要求1所述的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤三中种子培养基由蛋白胨15g/L，酵母膏5g/L，酪素3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。

5.根据权利要求1所述的高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤三中发酵培养基由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。