[发明专利]一种冻存液

说明书

技术领域

本发明是一种冻存液，属于生物体外诊断试剂技术领域。

背景技术

酶联免疫吸附（ELISA）实验因其灵敏度高，样本容易获得，操作简单已成为国际公认的蛋白定量金标准。ELISA试剂盒制备的关键技术之一就是标准品的制备。目前ELISA标准品的保存方法有甘油-20度保存法和真空冷冻干燥法。甘油低温保存，蛋白活性通常可保持6个月至1年。常规真空冷冻干燥，蛋白活性能够保持两年，但这不能满足ELISA试剂盒长期保存的需要，标准品需要更长的蛋白活性保持时间。

近年来，传统ELISA标准品的制备过程大都使用真空冷冻干燥法，但没有使用专门用于ELISA标准品制备的冻存液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能使ELISA标准品在4度保存3年以上，蛋白活性保持在99.5%以上，蛋白活性变异在1%以内的冻存液。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该冻存液以PBST缓冲液作为溶剂，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.2-7.4，所述BSA的质量分数为0.5%-10%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。

作为优选，所述PBST缓冲液PH=7.3，BSA的质量分数为10%，海藻糖的质量分数为30%。

本发明标准蛋白在进行常规的冷冻步骤前先用所述冻存液进行溶解，在冻存液的保护下，再通过真空冷冻干燥对标准蛋白进行固化保存，可以保护标准蛋白，使蛋白活性稳定。

本发明与现有技术相比具有的优点是：用该冻存液对ELISA标准蛋白进行真空冷冻干燥后制得的标准品可以在4度条件下保存，保存时间更长，蛋白活性保持水平更高，蛋白活性变异更少。增加了ELISA试剂盒的保存时间和稳定性，减少了ELISA试剂盒因标准品活性降低或丧失而报废，减少经济损失。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。

实施例1：以Human IL-6标准蛋白为例，采用本发明所述冻存液进行真空冷冻干燥得到Human IL-6 标准品的步骤如下：

a、在磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.3的PBST缓冲液中加入BSA和海藻糖，使BSA的质量分数为10%，海藻糖的质量分数为30%，得到冻存液。

b、将所述冻存液用0.22um微孔滤膜抽滤，得到抽滤冻存液；

c、将Human IL-6标准蛋白用所述抽滤冻存液稀释至目的浓度，得到Human IL-6标准浓度蛋白溶液；

d、将所述Human IL-6标准浓度蛋白溶液移至2ml的聚丙烯塑料管，每管存放100ul，用铝箔纸封口后-80度过夜；

e、过夜后用注射器针头在铝箔纸上扎3个小孔，10pa以内真空冷冻干燥8小时，至完全干燥，得到Human IL-6 标准品；

f、除去铝箔纸，拧紧管盖，贴标签，4度保存。

上述Human IL-6 标准品经过37度加速试验，可以保存28天。根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存1天相当于4度保存48天，因此得出本实施例的Human IL-6 标准品在4度可保存3年以上。

实施例2：以实施例1中制得的Human IL-6标准品为例进行蛋白活性与平行性实验，冻干后与冻干前相比，蛋白活性保持在99.5%以上。20个Human IL-6标准品，活性变异在1%以内。

其他实施例：以Human IL-6标准蛋白为例制成Human IL-6标准品后进行保存时间测试，所述冻存液中BSA和海藻糖的质量分数是以下表格中的配比，步骤与实施例1相同，不同配比对应的37度加速试验测得的保存天数如下表：