[发明专利]一种昆虫性别调控构建物，调控方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和发育调控领域，具体地，本发明涉及一种昆虫性别调控构建物，调控方法及其应用。

背景技术

专养雄蚕在蚕业生产上是一项非常重要的技术，因为雄蚕茧的茧层率和鲜茧出丝率要比雌蚕茧高，而且雄蚕食桑量少，叶丝转化率高；此外，雄蚕体质强健，更容易饲养，而且雄蚕丝纤度细、净度好，适于剿制高品位生丝。为此，世界各国科学家对专养雄蚕技术进行了一系列的探索。

1975年俄罗斯科学家Strunnikov V.A.等运用辐射诱变等技术手段，育成了家蚕性连锁平衡致死系。在性连锁平衡致死系内自交，其后代雌雄性个体各有一半存活，使品系得以保持。当平衡致死系的雄虫与常规品系的雌虫交配的后代只有雄虫能够存活，雌虫全部致死，达到专养雄蚕的目的。1996年，浙江省农业科学院从俄罗斯科学院引进了以家蚕性连锁平衡致死系S-8、S-14，并开展了利用性连锁平衡致死技术实现专养雄蚕的研究。经10年攻关研究，创建了家蚕性连锁平衡致死系细胞控制基因和导入方法（专利号：ZL01132108.3）、回交改良家蚕性连锁平衡致死系的方法（专利号：ZL01126809.3）、一种杂交改良家蚕性连锁平衡致死系性状的方法（专利号：200810061660.5）三项国家发明专利；建立了一个低成本的雄蚕杂交种繁育方法；育成了秋华×平30、华菁×平60等家蚕性连锁平衡致死实用蚕品种，雄蚕率达99.8%，茧层率和出丝率比常规品种提高23％，综合经济效益提高20％左右。

利用辐射处理等手段可以使雄虫不育，然后通过大量饲养不育雄虫并进行野外释放，不育雄虫与自然种群中的雌虫交配后不能产生后代，从而达到害虫防治的目的。这种昆虫不育技术（Sterile Insect Technique,SIT）在防治螺旋蝇、柑橘大实蝇等害虫方面已经取得了成功。但是该方法也存在着一些问题，如处理后的害虫竞争力差、大规模饲养成本高等。

由于性连锁平衡致死体系使用的家蚕品种是通过辐射突变所获得，品种内的染色体结构和遗传稳定性存在着变异的可能。因此，本领域目前迫切需要开发新型技术来弥补性连锁平衡致死系统的不足。

发明内容

本发明的目的就是提供一种昆虫性别调控构建物。

本发明的另一目的就是提供一种昆虫性别调控方法及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种转基因构建物，所述的构建物具有下述元件：doublesex基因（双性基因）和四环素阻遏反式激活蛋白编码元件（TAV），并且所述四环素阻遏反式激活蛋白编码元件（TAV）插入在doublesex基因（双性基因）的选择性剪切外显子中。

在另一优选例中，所述四环素阻遏反式激活蛋白编码元件（TAV）插入在doublesex基因（双性基因）的第三个外显子中。

在另一优选例中，所述的构建物还包括四环素结合序列（TetO）。

在另一优选例中，所述的构建物还包括选自下组的元件或其组合：启动子、终止子、poly(A)元件、转运元件、基因靶向元件、筛选标记基因、增强子、抗性基因、转座酶编码基因。

在另一优选例中，所述的doublesex基因来自鳞翅目昆虫。

在另一优选例中，所述的鳞翅目昆虫包括（但不限于）：家蚕、亚洲玉米螟、棉铃虫、或小菜蛾。

在另一优选例中，所述的doublesex基因来自家蚕。

在另一优选例中，所述的doublesex基因（双性基因）具有SEQ ID NO：1所示的序列。

在另一优选例中，所述的四环素阻遏反式激活蛋白编码元件具有SEQ IDNO：2所示的序列。

在另一优选例中，所述的筛选标记基因为荧光蛋白编码基因，优选gfp(绿色荧光蛋白编码基因、或DsRed红色荧光蛋白编码基因。

在另一优选例中，所述的四环素结合序列（TetO）具有SEQ ID NO：3所示的序列。

在另一优选例中，所述的doublesex基因与启动子或终止子可操作地连接。

在本发明的第二方面，提供了一种载体，所述载体含有第一方面所述的转基因构建物。

在另一优选例中，所述载体选自：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、或动物细胞载体、穿梭载体。

在另一优选例中，所述的载体为转座子载体。

在本发明的第三方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有第一方面所述的构建物或第二方面所述的载体，或所述的宿主细胞染色体整合有第一方面所述的构建物或第二方面所述的载体。