[发明专利]一种变形链球菌感染及致龋动物模型建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，特别涉及一种变形链球菌感染及致龋动物模型建立方法。

背景技术

龋病是人类最普遍的疾病之一，发病率高，WHO将其与癌症和心血管疾病并列为人类三大重点防治疾病。世界卫生组织最新发布的《全球口腔健康报告》中，估计全球63亿人口有50亿人患过龋齿，在发达国家中60％～90％的学龄儿童和大部分成人患过龋齿，在我国成人发病率为50％，全世界60~90%的学龄儿童和近100%的成年人有龋齿，它已然成为威胁人类口腔健康的全球性问题。

自20世纪80年代以来，各国均投入大量资金研究龋病。龋病动物模型模拟人体致病环境，为研究龋病的致病机理、发病过程及防治提供了重要的药理研究依据。建立龋病动物模型，通过药理药效实验研究，很好地阐释防治龋齿药物的作用机理，为研究新的龋病防治方法提供保障。作为龋病研究的重要手段，龋病动物模型研究受到人们的广泛关注。近年来，国内外研究者对龋病动物模型展开了大量的实验，分别用恒河猴、豚鼠、兔、小型猪、仓鼠、大鼠等建立动物模型。啮齿动物(鼠和仓鼠类)及灵长类动物对龋病易感，猴类的生理结构特征与人类非常接近，作为实验动物最为理想，但由于数量少，价格贵，其广泛受到限制。鼠和仓鼠类啮齿动物体积小，便于大量地应用于实验、重复性好；同时，形成龋损速度相对较快，能近似模拟人类龋病，目前已广泛用于实验研究。变形链球菌(S.mutans)作为最主要的致龋菌广泛地应用在实验性动物龋病模型的建立上（樊明文主编，口腔医学新进展，湖北科技出版社，1993。Madison KM,et al.J Dent Res,1991,70:38）

动物模型除采用单一变形链球菌感染SD大鼠外，还有采用混合菌感染大鼠，如Ooshima 等（Ooshima T,et al.Caries Res,1991,25:138.Ooshima T,et al.Caries Res,1992,26:124）将30天鼠龄的无菌SD大鼠利用外科手术方法摘除其颌下腺和舌下腺并结扎腮腺导管，手术后24~28天连续5天感染S.mutans MT8148、血链球菌ST3R和唾液链球菌HT3R。同时，饲以Keyes2000#致龋饮食，于84天鼠龄结束实验时，大鼠大部分磨牙均产生严重龋坏。无论单一菌还是混合菌感染动物，制作动物模型，细菌均可定植于牙齿，且导致明显的龋病。但这种方法需要做复杂的手术，而且摘除颌下腺和舌下腺并结扎腮腺导管对口腔生理改变很大，不适用于正常大鼠口腔环境的致龋研究及模拟人体的的致龋过程。

虽然已有很多关于龋齿动物模型的报道，但是以往的动物模型依然存在很大的问题。首先，细菌感染定植不稳定，定植量也均一，随时间的延长，细菌容易自然清除，而且龋坏不明，显难以达到实验的要求。S.mutans在SD大鼠牙齿表面感染初期主要是依靠其自身的粘附能力定植，感染菌液在口腔和牙齿表面的停留时间与感染成功率成正比。

卡波姆是1950年由美国Goodrich公司生产，在1957年就被英美等国家的药典收载，在我国2000年被药典收载至今。卡波姆中存在大量的可形成氢键的羧基，而氢键是粘附机制的组成部分，高度离子化可形成更好的粘附性。同时，其被中和使羧基离子化后，由于负电荷的相互排斥作用，使分子链弥散伸展，呈极大的膨胀状态，并具粘性。聚合物膨胀的越快，它与粘蛋白发生作用就越快，从而保证了强的粘性（翁升，生物黏附制剂的黏附机制及其新剂型的发展近况，海峡药学，2008，20(7)：31-33）。卡波姆目前主要用于眼用生物粘附剂、鼻内生物粘合剂、颊部生物粘合剂、阴道生物粘合剂、直肠内生物粘合剂和胃肠道生物粘合剂。姚悦等以卡波姆940为基质，研制了具有一定粘稠度和粘附性的草酸钾凝胶，可明显延长药物在口腔的滞留时间，疗效增强（姚悦，李煜，钟良军等，草酸钾凝胶的研制与治疗牙本质敏感症的临床观察，实用口腔医学杂志，2007，23(4)：593-595）。

针对S.mutans感染初期的粘附定植的特点，本发明用增稠剂卡波姆940与S.mutans混合，通过提高菌液粘稠度，增加菌液在口腔和牙齿表面的停留时间，从而增加S.mutans的感染定植量。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种S.mutans感染及致龋动物模型建立方法，采用卡波姆940作为增稠剂，增加感染菌液粘稠度，提高感染效率，增强致龋效果。

一种S.mutans感染及致龋动物模型的建立方法，包括如下步骤：

（1）卡波姆940溶液配制