[发明专利]唐氏综合征21号染色体相关miRNA、基因、筛选方法和应用

权利要求书

1.一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA基因，具有如SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的miRNA基因在制备诊断或检测唐氏综合征试剂中的应用。

3.如权利要求1所述的miRNA基因在制备诊断或检测唐氏综合征基因检测芯片中的应用。

4.一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA的前体，具有如SEQ IDNO.2的核苷酸序列。

5.如权利要求1所述的miRNA的前体在制备诊断或检测唐氏综合征试剂中的应用。

6.如权利要求1所述的miRNA的前体在制备诊断或检测唐氏综合征试剂中的应用。

7.一种与唐氏综合征21号染色体相关的miRNA，具有如SEQ ID NO.3的核苷酸序列。

8.如权利要求1所述的miRNA在制备诊断或检测唐氏综合征试剂中的应用。

9.如权利要求1所述的miRNA在制备诊断或检测唐氏综合征基因检测芯片中的应用。

10.一种唐氏综合征21号染色体相关miRNA的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

分别采集唐氏综合征胎儿和正常胎儿的脐带血单个核细胞样品；

提取所述样品中的总RNA，用变性聚丙烯胺凝胶电泳分离回收长度不大于30个核苷酸的小RNA，在T4RNA连接酶的作用下，在回收的小RNA的5’端加上如SEQ ID NO.4的核苷酸序列接头，3’端加上如SEQ ID NO.5的核苷酸序列接头，经TBE聚丙烯胺凝胶电泳纯化后，经Solexa小RNA反转录引物和PCR扩增后制成小RNA的cDNA文库，再使用TBE聚丙烯胺凝胶电泳对所述cDNA文库进行纯化并进行测序分析；

对测序后所得的小RNA分子进行去接头和去污染处理，并从中筛选出长度为18~30nt的核苷酸序列，用SOAP软件将所得序列与人全基因组序列进行比对分析，将匹配上的序列按照GenBank>Rfam>miRBase17.0>repeat>exon>intron的优先级顺序进行分类注释，然后将intron和未比对上序列的小RNA分子序列作为新miRNA的数据源，用MIREAP和MiPred两种软件对所述新miRNA所在的染色体进行分析，得到所述唐氏综合征21号染色体相关miRNA。