[发明专利]羧甲基化分子修饰制备高效低聚黄芪多糖的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物活性多糖的制备和结构改造技术领域，具体涉及一种羧甲基化分子修饰制备高效低聚黄芪多糖的方法。

背景技术：

近年来的研究发现黄芪中含多糖、皂甙、黄酮、氨基酸等多种有效成分，这些活性成分均有促进抗体生成和免疫反应的作用，其中以对黄芪多糖的研究报道为多。黄芪多糖是黄芪的主要活性成分之一，经过高科技萃取、分离而得到的。

目前萃取的黄芪多糖其免疫调控活性和抗氧化力差，浪费原材料，且浪费时间。

发明内容：

本发明的目的是提供一种羧甲基化分子修饰制备高效低聚黄芪多糖的方法，它具有很好的调控活性和抗氧化力，节约材料，节省时间。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用如下技术方案：它的制备方法为：采用氢氧化钠-一氯乙酸体系法进行羧甲基化分子修饰，以产物量、羧甲基替代度和免疫调控功能为指标，以反应温度、试剂配比和反应时间为因素，用正交试验优选出黄芪多糖氢氧化钠-一氯乙酸法修饰的最佳条件为反应温度65℃；氢氧化钠和一氯乙酸的配比1.6∶1、反应时间3.5h。取黄芪煎液第一次缓慢加入乙醇使终浓度达50％，去沉淀；上清液再加入乙醇使终浓度达60％，取沉淀得到粗多糖，黄芪多糖纯化后用优化的条件修饰，通过饲养试验研究比较，所得黄芪多糖经纯化和羧甲基化修饰后其促生长和增强免疫活性最强。

羧甲基化黄芪多糖制备条件为：

称取上述制备的10g黄芪多糖，加入至100mL异丙醇溶剂中，加入1％氢氧化钠溶液90mL，搅拌使碱液溶解后，在快速搅拌条件下，通过真空滴液漏斗滴入一氯乙酸的异丙醇溶液(1∶1.2，50mL)，控制温度在65℃搅拌反应3.5小时。反应结束后将上层异丙醇倾出并回收利用，下层加入5％盐酸溶液，快速搅拌下加入乙醇50mL，过滤，固体物部分溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体，即羧甲基黄芪多糖。

羧甲基化黄芪多糖的理化性质测定：

一、多糖含量测定：

原黄芪多糖的含量最高为98.46％，羧甲基化黄芪多糖的多糖含量均低于原黄芪多糖，表明羧甲基化修饰对于多糖含量是有损失的。由羧甲基化多糖得率可知最佳条件为反应温度65℃；氢氧化钠和一氯乙酸的配比1.6∶1、反应时间3.5h。其取代度为0.82。

本发明具有很好的调控活性和抗氧化力，节约材料，节省时间。

附图说明：

图1为本发明中L₉(3⁴)正交示意图，

图2为本发明中羧甲基化修饰对黄芪多糖含量的影响示意图，

图3为本发明中羧甲基化黄芪多糖红外光谱示意图，

图4为本实施例中日粮羧甲基化黄芪多糖对肉鸡生长性能的影响示意图，

图5为本实施例中日粮羧甲基化黄芪多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响示意图，

图6为本实施例中日粮羧甲基化黄芪多糖对肉仔鸡一免和二免后不同阶段血清BSA抗体效价(OD₄₅₀)的影响示意图，

图7为本实施例中日粮羧甲基化黄芪多糖对肉仔鸡血液淋巴细胞培养液细胞因子的影响示意图，

图8为本实施例中日粮羧甲基化黄芪多糖对肉仔鸡外周全血淋巴细胞转化率的影响示意图，

图9为本实施例中日粮羧甲基化黄芪多糖对肉仔鸡脾脏抗氧化酶及脂质过氧化物的影响示意图。

具体实施方式：

参看图1-图3，本具体实施方式采用如下技术方案：它的制备方法为：采用氢氧化钠-一氯乙酸体系法进行羧甲基化分子修饰，以产物量、羧甲基替代度和免疫调控功能为指标，以反应温度、试剂配比和反应时间为因素，用正交试验优选出黄芪多糖氢氧化钠-一氯乙酸法修饰的最佳条件为反应温度95℃、氯磺酸与吡啶的配比1∶6、反应1h；取黄芪煎液第一次缓慢加入乙醇使终浓度达50％，去沉淀；上清液再加入乙醇使终浓度达60％，取沉淀得到粗多糖，黄芪多糖纯化后用优化的条件修饰，通过系列抗病毒和增强免疫活性比较，所得黄芪多糖经纯化和羧甲基化修饰后其抗病毒和增强免疫活性最强。

羧甲基化黄芪多糖制备条件为：

以反应温度A，氢氧化钠和一氯乙酸摩尔比B和反应时间C为因素，按3因素3水平的正交试验L9(3³)设计9种修饰条件(参看图1)：