[发明专利]大豆脂肪氧化酶Lox3的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其抗体和应用

说明书

分案说明

本申请案是申请日为2011年8月2日，申请号为201110219334.4，发明名称为大豆脂肪氧化酶同功酶的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其抗体和应用专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体，特别涉及分别分泌抗大豆脂肪氧化酶同功酶Lox1、Lox2和Lox3的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单克隆抗体，细胞株保藏编号分别为：CGMCC5121、CGMCC5122及CGMCC5123，还涉及各自分泌的单克隆抗体在利用双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）检测大豆脂肪氧化酶同功酶当中的应用，属于生物检测技术领域。

背景技术

大豆中含有三种脂肪氧化酶（Lipoxygenase，简称Lox）同功酶即Lox1、Lox2和Lox3，它们能专一催化具有cis,cis-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸通过分子加氧，形成具有共轭双键的氢过氧化衍生物，即醛、酮等具有挥发性的异味物质，使大豆具有豆腥味，从而降低了豆制品的耐储性、食用性和营养价值。通常在大豆加工过程中人们通过加热、微波照射、改变介质的pH值、有机溶剂萃取和醛水解酶等方法消除豆腥味，但这些方法都会不同程度地降低豆制品的营养价值，并且使得成本增高。培育脂肪氧化酶缺失品种可以从根本上解决上述问题。但在脂肪氧化酶缺失材料的选育过程中，Lox在田间不存在指示性状，从种子外观和农艺性状上无法鉴别，并且田间脂肪氧化酶缺失材料选择工作量大，因此急需一种快速、简便、成本低、一次可以同时检测出三种脂肪氧化酶的检测方法。

目前脂肪氧化酶的常用的检测方法是薄层等电聚焦电泳（IEF）检测方法，这种方法主要是通过酶染法和蛋白染色方法结合使Lox同功酶带显色，虽然能同时检测出三种脂肪氧化酶，但检测中常常会因Lox的缺失而发生其它Lox等电点正极漂移现象；另外该方法所需设备、试剂昂贵，操作要求严格，一般育种、仓储单位和加工质检部门不便操作。

另外据日本Suzuki,Y等1992年报道（Prodution and use of monolional antibodies against rice embryo lipoxygenase-3,Biosci Biotech.Biochem.56:678-679）：用单克隆抗体可以检测水稻中的Lox3，这种方法虽然结果准确可靠，但检测过程中除需要做封闭外，还需要过夜包被酶标板，因此耗时，操作起来不方便。

申请号00112539.7的专利公开了一种作物脂肪氧化酶同功酶的检测方法，该方法具有操作简便、结果直观等特点。但由于它是利用脂肪氧化酶的偶联氧化还原指示剂显色反应的原理来进行测定的，所以它的灵敏度和特异性受到一定的限制。

发明内容

本发明的目的在于避免上述方法的缺陷，建立能分别分泌抗大豆脂肪氧化酶同功酶Lox1、Lox2、Lox3的特异性单克隆抗体的3个杂交瘤细胞株，利用这些细胞株分泌的特异性单克隆抗体来组装可以用于同时检测大豆中三种脂肪氧化酶同功酶的双抗体夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）检测试剂盒。该试剂盒适用于对大豆中三种脂肪氧化酶的定性和定量测定。

本发明所解决的第一个技术问题是提供了一组抗大豆脂肪氧化酶同功酶的单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于所述的单克隆抗体杂交瘤细胞株包括抗大豆脂肪氧化酶Lox1的单克隆抗体杂交瘤细胞株，为小鼠的脾细胞与SP2/0细胞经过细胞融合产生，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC5121；及

抗大豆脂肪氧化酶Lox2的单克隆抗体杂交瘤细胞株，为小鼠的脾细胞与SP2/0细胞经过细胞融合产生，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC5122；及

抗大豆脂肪氧化酶Lox3的单克隆抗体杂交瘤细胞株，为小鼠的脾细胞与SP2/0细胞经过细胞融合产生，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC5123。

所述的抗大豆脂肪氧化酶Lox1、Lox2、Lox3的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立方法如下：