[发明专利]检测钠/钾离子比的方法和试剂盒以及系统

权利要求书

1.一种检测液体样品中钠/钾离子比的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）用pH6.2～8.2的缓冲溶液和可溶性钠盐和钾盐配制钠/钾离子比不同的多个溶液样本，其中每个所述溶液样本中含有相同浓度的菁染料及在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子；

（2）将所述多个溶液样本置于荧光光谱仪下，采用540nm至570nm的激发波长，检测采集波长处的荧光强度值；

（3）以各个所述溶液样本的钠/钾比作为横坐标或纵坐标，以步骤（2）中测得的采集波长处的荧光强度值为纵坐标或横坐标作图，从而获得钠钾离子比的标准曲线；

（4）在待测液体样品中加入所述的DNA分子，并调节pH值，以使待测液体样品中的菁染料和DNA分子的浓度以及pH值与步骤（1）中的溶液样本一致，从而得到测试溶液；

（5）将步骤（4）中获得的测试溶液置于荧光光谱仪下，采用与步骤（2）中相同的激发波长，检测波长在所述采集波长处的荧光强度值；

（6）利用步骤（5）中测得的中测得的荧光强度值在步骤（3）中获得的钠/钾离子比标准曲线中找到对应的测试溶液的钠/钾比值；

其中所述采集波长在570nm至700nm的范围内。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体的DNA分子为分子序列中含有下式I的结构的DNA分子：

GGYGGZGGMGG

式I

其中：Y、Z和M独立地代表一个或多个任意碱基，G代表鸟嘌呤碱基。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述G-四链体DNA的序列选自以下序列：TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TTGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGA、TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、GGTTGGTGTGGTTGG、TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG或GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中所述菁染料为式II的化合物，

式II

其中：R₁为C₁-C₆的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R₂、R₃、R₄和R₅独立地选自H或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃与它们所连接的碳原子一起形成5元至7元的环结构，或者R₄和R₅与它们所连接的碳原子一起形成5元至7元的环结构；R₆和R₇为C₁-C₆烷基或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；Y为反离子，根据R₆和R₇所带电荷的不同而不同，若R₆和R₇为烷基，则Y为卤素阴离子；若R₆和R₇只有一个带有磺酸根，则无需Y作为反离子；若R₆和R₇均带有磺酸根，则Y为三乙胺阳离子；X₁，X₂独立地选自C、O、S、Se或Te。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述C₁-C₆的烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基或异己基。

6.如权利要求4所述的方法，其中R₁选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R₂、R₃、R₄和R₅独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基或异己基。