[发明专利]一种红桦组织培养育苗方法

权利要求书

1.一种红桦组织培养育苗方法，其包括如下步骤：

(1)无菌培养物的建立

选取当年生新发红桦嫩梢，剪去叶片和叶柄，切割成1.0～1.5cm长带有顶芽和腋芽的节段，将带芽节段置于自来水下冲洗2～3h，然后用洗衣粉液浸泡10～30min，用软刷刷洗节段后再置流水下冲洗30min；在超净工作台上，用60-80％乙醇浸泡15～30s，无菌水冲洗2～4次，然后用0.05～0.15％的氯化汞处理6～8min，用无菌水冲洗4～6次，用滤纸吸干带芽节段获得无菌培养物；

(2)芽苗的诱导

将上述步骤获得的无菌带芽节段接种到芽苗诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，诱导培养基为MS、1/2MS、1/4MS基本培养基中的任意一种或者两种的组合，加入0.5～1.5mg/L的BA，0.1～0.5mg/L的IBA，以及20～40g/L的蔗糖和5～8g/L的琼脂，用HCl和/或NaOH调节培养基pH为5.8～6.0；

(3)芽苗的增殖

待培养物出现点状芽后，把上述步骤获得的培养物转移到芽苗增殖培养基进行芽苗的继代扩繁增殖，增殖培养基为1/2MS基本培养基，加入0.5～2.0mg/L的BA，0.2～0.8mg/L的IBA，以及20～40g/L的蔗糖和5～8g/L的琼脂，用HCl和/或NaOH调节培养基pH为5.8～6.0；重复上述继代增殖步骤以获得足够的芽苗；

(4)芽苗生根培养

选取步骤(3)中增殖的2～3cm左右长的芽苗转移到生根培养基中生根以获得完整的植株，生根培养基为MS、1/2MS、1/4MS基本培养基，附加0.6～1.0mg/L的IBA，0.1～0.3mg/L的NAA，以及10～30g/L的蔗糖和5～8g/L的琼脂，用HCl和/或NaOH调节培养基pH为5.8～6.0。

(5)炼苗与移栽

移栽前，把步骤(4)获得的生根芽苗在培养架上炼苗1～2周，逐渐降低培养容器湿度，并适当增加光照，以促进茎叶保护组织的发生和气孔功能的恢复；炼苗后取出生根组培苗，洗净根上滞留的琼脂培养基，用杀菌剂护根处理后移入营养土中培养，控制环境湿度80～90％，稍后逐渐降低环境湿度，待有新芽发出后按常规苗圃育苗措施管理。

2.根据权利要求1所述的育苗方法，步骤(2)所述芽苗诱导培养基为1/2MS基本培养基，附加1.5mg/L的BA，0.3mg/L的IBA，以及30g/L的蔗糖和6.5g/L的琼脂，用1mol/L的HCl和NaOH调节培养基pH为5.8～6.0。

3.根据权利要求1所述的育苗方法，步骤(3)所述芽苗增殖培养基优选为1/2MS基本培养基，附加2.0mg/L的BA，0.4mg/L的IBA，以及30g/L的蔗糖和6.5g/L的琼脂，用1mol/L的HCl和NaOH调节培养基pH为5.8～6.0。

4.根据权利要求1所述的育苗方法，步骤(4)所述芽苗生根培养基优选为1/4MS基本培养基，附加0.8mg/L的IBA，0.1mg/L的NAA，以及20g/L的蔗糖和6.5g/L的琼脂，用1mol/L的HCl和NaOH调节培养基pH为5.8～6.0。

5.根据权利要求1所述的育苗方法，其特征在于诱导、增殖和/或生根培养的条件为：培养温度为22±2℃，湿度70～80％，光照强度2000～4000lx，光照时间14～18h/d。